梗阻性黃疸對腎臟水通道蛋白2影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、前言：梗阻性黃疸(Obstructivejaundice，OJ)可以造成腎功能損傷，臨床表現(xiàn)往往首先出現(xiàn)少尿現(xiàn)象，以腎小管壞死為特征的急性腎功能衰竭(ARF)是OJ術(shù)后的主要并發(fā)癥之一。目前研究梗阻性黃疸如何引起腎臟生理及病理改變無明確進(jìn)展。AQP-2位于腎臟近端小管主細(xì)胞和內(nèi)髓部集合管上皮細(xì)胞頂部質(zhì)膜上，參與介導(dǎo)抗利尿激素(ADH)依賴的腎集合管通透性，在腎臟尿濃縮機(jī)制中起到重要作用。OJ時(shí)血容量減少，繼而ADH增加、AVP活化，AD

2、H、AVP通過長時(shí)調(diào)節(jié)和短時(shí)調(diào)節(jié)控制AQP-2及AQP-2mRNA的表達(dá)。有文獻(xiàn)報(bào)道，缺血再灌注性腎功能衰竭中AQP-2及活化AQP-2表達(dá)均出現(xiàn)明顯下調(diào)。 本實(shí)驗(yàn)以Wistar大鼠梗阻性黃疸動物模型為基礎(chǔ)，通過測量血漿膽紅素、尿素氮及肌酐、腎臟AQP-2、AQP-2mRNA含量，探討梗阻性黃疸腎損傷機(jī)理。 材料與方法：1.實(shí)驗(yàn)動物：選取成年雄性Wistar大鼠40只，體重200-250g，隨機(jī)分為A、B、C、D四組(n

3、=10)，A組為梗阻性黃疸7天實(shí)驗(yàn)組、B組為假手術(shù)7天組、C組為梗阻性黃疸14天組、D組假手術(shù)14天組。模型建立后7天及14天分別剖殺A、B及C、D組實(shí)驗(yàn)動物，檢測各組實(shí)驗(yàn)動物的肝功能、腎功能等生化指標(biāo)，判斷動物模型是否符合本實(shí)驗(yàn)要求，Westernblotting法測定各組大鼠腎臟AQP-2的含量，RT-PCR技術(shù)檢測各組大鼠腎臟AQP-2mRNA的表達(dá)。 2.數(shù)據(jù)處理：采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 實(shí)驗(yàn)

4、結(jié)果1.各組大鼠血清肌酐檢測結(jié)果P＞0.05，無顯著性差異；血尿素氮檢測A、C及C、D組間P＜0.01，有非常顯著性差異，而其余各組間P＞0.05，無顯著性差異。 2.Westernblotting法測定AQP-2含量結(jié)果顯示A、C組，C、D組間P＜0.01，有非常顯著性差異，A、B組間P＜0.05，有顯著性差異，B、D組間P＞0.05，無差異。 3.利用PCR技術(shù)檢測AQP-2mRNA表達(dá)結(jié)果提示A、B，C、D及A、C

5、組間P＜0.01，有非常顯著性差異，B、D組間P＞0.05，無差異。 討論梗阻性黃疸圍手術(shù)期ARF的機(jī)制目前有腸粘膜屏障受損內(nèi)毒素血癥；腎缺血再灌注性損傷以及膽紅素性腎損傷等幾種主要理論。以往檢測腎功能指標(biāo)在探討早期腎功能損傷的病因時(shí)受到限制。近期國外有大量報(bào)道認(rèn)為藥物、缺血等原因造成的腎功能衰竭時(shí)腎水通道蛋白的表達(dá)均出現(xiàn)明顯變化，為進(jìn)一步明確梗阻性黃疸圍手術(shù)期腎功能損傷的病因和病理生理變化提供了方向。AQP-2位于腎臟近端小管

6、主細(xì)胞和內(nèi)髓部集合管上皮細(xì)胞頂部質(zhì)膜上，在腎臟尿濃縮機(jī)制中起到重要作用。 本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)膽道梗阻造成腎臟AQP-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。這一研究結(jié)果證實(shí)膽道梗阻時(shí)，腎臟確實(shí)出現(xiàn)了不同程度的結(jié)構(gòu)損傷和功能損傷。腎缺血以及一氧化氮、自由基等細(xì)胞因子對腎集合管上皮主細(xì)胞的損傷可能是主要的原因，加之膽紅素、內(nèi)毒素對腎集合管細(xì)胞的直接損傷，引起AQP-2蛋白表達(dá)下降。另外由于ADH、AVP的短時(shí)調(diào)節(jié)，管腔膜上活性AQP-2增多，部分AQP-2蛋

7、白脫落于小管腔而被尿液沖出?？赡芤虼艘鹉IAQP-2含量明顯減少。本實(shí)驗(yàn)中腎臟AQP-2mRNA表達(dá)增加?？赡苁茿DH、AVP的長時(shí)調(diào)節(jié)作用，另外，腎損傷早期階段，腎集合管主細(xì)胞對于AQP-2蛋白表達(dá)的變化可能還有調(diào)節(jié)能力，而AQP-2mRNA表達(dá)的增強(qiáng)可能是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的蛋白合成能力的一種反映。 大鼠和人的AQPcDNA基因組成具有共性，因此我們研究梗阻性黃疸大鼠腎AQP-2的變化可以在一定程度上反映人梗阻性黃疸時(shí)腎AQP-2的變