嵌合RSV抗原表位的重組流感減毒疫苗的免疫原性及免疫保護性的初步研究.pdf

1、目的：在成功構建的三株嵌合RSV抗原表位的重組流感減毒疫苗的基礎上，本研究對其多項指標進行鑒定，然后對其安全性、免疫原性及免疫保護性進行一個初步的研究，從中找到一種高效價株并探討其簡便的免疫接種途徑。
　　 方法：運用血凝、血抑實驗確定是否成功轉(zhuǎn)染出重組流感病毒；通過RT-PCR、SDS-PAGE、間接免疫熒光、電鏡觀察病毒形態(tài)等方法驗證轉(zhuǎn)染出的病毒是否正確；接種雞胚對病毒進行擴大培養(yǎng)后經(jīng)蔗糖密度梯度離心純化，TCID50方法測

2、定其病毒滴度；通過動物實驗對其安全性、免疫原性及免疫保護性進行一個初步的研究。
　　 結果：血凝、血抑實驗測得為陽性，表明成功轉(zhuǎn)染出重組流感病毒；經(jīng)RT-PCR鑒定重組病毒基因與質(zhì)粒序列相同，SDS-PAGE電泳鑒定表明流感的主要成分都存在；間接免疫熒光(IFA)檢測表明拯救出的病毒是以A/PR/8/34為骨架的重組病毒；電鏡觀察重組病毒與流感病毒的形態(tài)特征相似；通過蔗糖密度梯度法對重組病毒進行純化后，測得RSV-FLU/NS1

3、-F、RSV-FLU/NS1-G和RSV-FLU/NS1-F+G的病毒滴度分別為10-7.82/ml、10-7.5/ml、10-8/ml，10-5TCID50的病毒經(jīng)滴鼻途徑免疫BALB/c小鼠，通過對小鼠肺，鼻，腦中病毒載量的檢測發(fā)現(xiàn)，腦中沒有檢測到病毒，1天后鼻腔檢測不到病毒RSV-FU/NS1-F+G，第3天時檢測不到RSV-FLU/Ns14-F和RSV-FLU/NS1-G，10天后肺部檢測不到病毒，實驗中沒有小鼠死亡，這說明重組

4、病毒在小鼠上是安全的。對BALB/c小鼠鼻腔接種免疫表明：三株重組RSV-FLU/NS1病毒都產(chǎn)生了較高的HI及一定水平的針對RSV的抗體效價，同時也產(chǎn)生了sIgA。IgG1和IgG2a的測定和ELISpot實驗對細胞因子IL-4和IFN-γ的分泌性細胞水平的檢測結果表明重組病毒可以同時激活機體的細胞和體液免疫應答。小鼠血清中細胞因子的測定結果為IL-4和IFN-γ的分泌均比PBS組高。對病毒的免疫保護性評價結果為RSV-FLU/NS1

5、-F和RSV-FLU/NS1-G重組病毒疫苗對保護小鼠肺損傷具一定的作用，但RSV-FLU/NS1-F+G重組病毒疫苗的保護效果不理想。
　　 結論：成功轉(zhuǎn)染出三株嵌合RSV抗原表位的重組流感減毒疫苗，經(jīng)鑒定三株減毒疫苗基因組正確。免疫效果評價結果表明三株減毒疫苗是安全的，并且能夠引起小鼠體內(nèi)的免疫應答。其中，RSV-FLU-NS1-F和RSV-FLU/NS1-G重組病毒疫苗對保護小鼠肺損傷具一定的作用，但RSV-FLU/NS1