噬菌體展示流感通用疫苗免疫原性及保護效果的初步評價.pdf

1、流行性感冒是一種非常嚴重的全球性的呼吸道傳染病,是人類常見的上呼吸道感染疾病之一。它的流行特點是速度快、危害性大、極易變異、難以控制等。流感病毒表面抗原能不斷的發(fā)生抗原漂移和轉換,使本來有效的疫苗對變異株失去保護效果,致使流感難以控制。在研究流感病毒的過程中,對病毒流行的預防和控制任重而道遠。所以,研制具有廣譜保護特性的流感疫苗具有重要的社會意義和巨大的經濟價值。同時,動物實驗對研究流感病毒和評價疫苗有效性起到重要的作用,因此,流感病毒

2、感染動物模型的合理建立顯得尤為重要。本論文以沙鼠、豚鼠、雪貂、樹鼩作為研究對象,分別評價四種動物作為流感病毒動物模型的敏感性、相似性、可重復性、安全性、易行性和經濟性。選擇最適動物模型,評價基于A型流感病毒高度保守的M2e蛋白和B型流感病毒高度保守的BM2蛋白設計的新型A+B型廣譜流感緩控微球噬菌體展示疫苗的免疫原性和保護性效果。
　　 首先,采用三個型別的流感毒株A/威斯康星/67/2005(H3N2)、A/廣島/52/200

3、5(H1N1)和B/馬來西亞/2506/2004以滴鼻方式感染沙鼠、豚鼠、雪貂、樹鼩擬建立流感病毒動物模型。觀察四種動物被感染后的病理生理反應,采用血凝實驗、RT—PCR鑒定感染后鼻腔和肺部是否有病毒分布,利用細胞培養(yǎng)法檢測病毒載量的變化。通過流感病毒動物模型的建立,為疫苗免疫原性及保護效果的研究提供了一定的實驗依據。根據此結果,我們選擇豚鼠和雪貂作為模式動物進行噬菌體展示流感通用疫苗的免疫原性和保護性效果評價。以滴鼻的方式用毒種攻擊豚

4、鼠(50μl/只)雪貂(200μl/只),每天觀察感染動物的臨床癥狀,并于感染后第1、3、5、7、9、11和13天,取鼻腔洗液和肺組織以細胞培養(yǎng)法檢測病毒效價。經實驗確定,鼻腔中和肺組織中病毒滴度在3日時達到峰值。
　　 之后,將制備好的噬菌體微球疫苗以滴鼻的方式免疫豚鼠(50μl/只)和雪貂,(200μl/只),于第10天、第20天進行加強免疫。分別于第三次免疫后第十四天和第三十天對動物進行采血,用ELISA分別檢測血清中抗-