DTaP-sIPV四聯(lián)疫苗的制備及免疫原性研究.pdf

1、聯(lián)合疫苗為兒童免疫規(guī)劃的連續(xù)、簡(jiǎn)化和擴(kuò)大所必需。隨著納入擴(kuò)大免疫計(jì)劃(Expanded Program on Immunization,EPI)中疫苗種類的不斷增加,嬰幼兒接種次數(shù)也隨之增多。我國(guó)兒童一歲內(nèi)需接種10劑疫苗抗原7次。兒童免疫負(fù)擔(dān)之重可想而知,同時(shí)也增加了交叉感染的機(jī)會(huì)。為此,世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)和兒童疫苗組織(Children's Vaccine Initiative

2、,CVI)倡議研制聯(lián)合疫苗,使目前略閑麻煩的接種程序變得確實(shí)可行。聯(lián)合疫苗具有預(yù)防多種目標(biāo)疾病,減少接種針次,簡(jiǎn)化免疫程序,提高接種率,降低交叉感染機(jī)會(huì),為廣大家長(zhǎng)和兒童樂(lè)于接受,而且節(jié)約各種費(fèi)用,有利于EPI的推廣等優(yōu)越性。因此,制備多價(jià)聯(lián)合疫苗是當(dāng)今世界疫苗研究的發(fā)展方向。
　　 本論文旨在探討吸附無(wú)細(xì)胞百白破-Sabin株脊髓灰質(zhì)炎聯(lián)合疫苗(Daphtheria,Tetanus,acellular Pertussis sa

3、bin strain inactivated poliovirus combinationvaccine,DTaP-sIPV)的制備工藝,并比較不同SabinIPV劑量配比的DTaP-sIPV免疫大鼠的抗體水平,為確定聯(lián)合疫苗的最佳制備工藝提供參考。
　　 本研究全部?jī)?nèi)容都是關(guān)于DTaP-sIPV聯(lián)合疫苗的制備及其免疫原性研究。由于DTaP在國(guó)內(nèi)已廣泛應(yīng)用,其安全性和有效性已積累了大量數(shù)據(jù),而SabinIPV目前為止尚無(wú)應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)

4、,因此本論文著重比較分析SabinIPV在疫苗聯(lián)合前后免疫原性的變化。
　　 第一部分主要檢測(cè)內(nèi)容包括各組大鼠三針基礎(chǔ)免疫后血清中的各抗體水平、特異性IFN-γ的產(chǎn)生情況以及免疫后各組大鼠CD3/CD4/CD8分子表達(dá)的差異。使用本所研制的SabinIPV三價(jià)疫苗,通過(guò)改變不同劑量配比的SabinIPV,來(lái)制備兩批DTaP-sIPV(劑量1組和劑量2組),進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢定及穩(wěn)定性試驗(yàn),并聯(lián)合單獨(dú)的SabinIPV和已上市的DT

5、aP-wIPV(boostrixTM-polio,GlaxoSmithKline)作為對(duì)照對(duì)Wistar清潔級(jí)大鼠進(jìn)行3針基礎(chǔ)免疫后,微量中和試驗(yàn)測(cè)定血清中抗脊髓灰質(zhì)炎病毒3個(gè)型別的中和抗體效價(jià),ELISA檢測(cè)百白破抗體水平。結(jié)果表明,DTaP-sIPV劑量1、2組與DTaP-wIPV相比較,基礎(chǔ)免疫完成后差異無(wú)顯著意義,均可以誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的保護(hù)性中和抗體以及百白破抗體；與相對(duì)應(yīng)的SabinIPV相比較,組間中和抗體水平的差異無(wú)顯著意

6、義(P=0.227～0.959),證明sIPV與DTaP聯(lián)合以后并沒(méi)有影響sIPV的免疫原性,兩者之間具有良好的物理相容性,抗原之間無(wú)干擾現(xiàn)象。酶聯(lián)斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent spot,ELISPOT)測(cè)定針對(duì)Sabin株脊髓灰質(zhì)炎病毒的特異性IFN-γ的結(jié)果顯示,sIPV劑量2對(duì)照組三個(gè)型別所產(chǎn)生的斑點(diǎn)數(shù)都比較多。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組大鼠CD3/CD4/CD8分子表達(dá)的差異的結(jié)果顯示,DTaP-wI

7、PV組CD3+CD4+/CD3+CD8+比值最高。綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可認(rèn)為DTaP-sIPV聯(lián)合疫苗中的sIPV劑量采用Ⅰ型15DU/dose、Ⅱ型32DU/dose、Ⅲ型22.5DU/dose劑量時(shí)即可達(dá)到與DTaP-wIPV組相當(dāng)?shù)拿庖咝Ч?br>　　 第二部分主要檢測(cè)內(nèi)容包括監(jiān)測(cè)各組大鼠基礎(chǔ)免疫后不同時(shí)間的脊灰中和抗體水平和分析加強(qiáng)免疫前后的脊灰中和抗體水平的變化。在完成三針基礎(chǔ)免疫后,每隔3個(gè)月采血分離血清檢測(cè)中和抗體水平,監(jiān)測(cè)s

8、IPV的免疫持久性；此外,在加強(qiáng)免疫前后采血并分離血清,來(lái)進(jìn)一步觀察sIPV的免疫原性變化。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,在基礎(chǔ)免疫后至加強(qiáng)免疫前,DTaP-sIPV劑量2組的三個(gè)型別的中和抗體血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率均保持在100％,中和抗體水平隨著時(shí)間下降的比較緩慢,尤其是Ⅱ、Ⅲ型中和抗體水平,曲線比較平穩(wěn),具有良好的免疫持久性。各實(shí)驗(yàn)組在加強(qiáng)免疫后檢測(cè),各型中和抗體在短期內(nèi)明顯升高,均可以誘導(dǎo)出高水平的保護(hù)性中和抗體。綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可認(rèn)為無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗原液1