口蹄疫DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫原性的初步研究.pdf

1、口蹄疫（Foot-and-Mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起偶蹄動物的最烈性傳染病之一。目前FMD呈世界范圍流行趨勢。特別是近幾年來O型、A型和Asia I型FMD在我國周邊國家或東南亞地區(qū)時有發(fā)生，對我國養(yǎng)殖業(yè)構(gòu)成了嚴重的威脅。
　　以本室構(gòu)建的復(fù)合多表位表達盒OAAT及AsiaI型FMDV的P1-2A-3C為基礎(chǔ)構(gòu)建了FMDV核酸疫苗pI

2、RES-OAAT-P1-2A-3C。用限制性酶切對其進行了鑒定。該DNA疫苗轉(zhuǎn)染HeLa細胞表達的蛋白在間接免疫熒光(IFA)檢測中與O型FMDV多克隆血清和AsiaI型FMDV多克隆血清均能結(jié)合，在FITC標(biāo)記的二抗作用下經(jīng)伊文斯蘭染色可見較好的綠色熒光。
　　以BALB/c小鼠為試驗動物，應(yīng)用該DNA疫苗對小鼠進行免疫接種后，檢測體液與細胞免疫指標(biāo)。研究結(jié)果表明，pIRES-OAAT-P1-2A-3C及滅活苗免疫組的小鼠均能產(chǎn)

3、生特異性抗體（與對照組相比，p<0.05）。pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫組抗Asia I、O抗體效價，低于滅活疫苗免疫組。但均高于空質(zhì)粒pIRE1neo對照組及PBS對照組（p<0.01）。流式細胞儀檢測所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果表明，與滅活苗、空質(zhì)粒pIRE1neo對照組及PBS對照組比較，用所構(gòu)建的DNA重組體DNA疫苗免疫的試驗組小鼠的T淋巴細胞亞類CD4+和CD8+的數(shù)量顯著提高（p<0.05）。而各對照組之間差異不顯

4、著。用ELISPOT檢測小鼠脾淋巴細胞分泌 IFN-γ斑點數(shù)試驗結(jié)果表明，pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫組 IFN-γ斑點數(shù)量（64.726）較滅活苗（39.625）顯著增多（p<0.05）。而各對照組之間差異不顯著。應(yīng)用MTT法檢測淋巴細胞增殖結(jié)果顯示，pIRES-OAAT-P1-2A-3C和滅活苗組小鼠 T淋巴細胞均出現(xiàn)較明顯的特異性和非特異性增殖反應(yīng)。且pIRES-OAAT-P1-2A-3C組增殖能力強于滅活疫苗組（p

5、<0.05）。
　　給豚鼠進行2次免疫，用250ID50的FMDV進行攻擊，觀察其保護效果。滅活疫苗組4只豚鼠均未出現(xiàn)任何 FMD癥狀，表明獲得完全保護。pIRES-OAAT-P1-2A-3C組有2只獲得完全保護。說明該疫苗具有一定保護效果。
　　上述結(jié)果證實了表達盒OAAT與P1-2A-3C的表達組合在鼠體內(nèi)的良好的免疫原性。為其它載體應(yīng)用該組合進行疫苗研制提供了試驗依據(jù)。為研制有效的口蹄疫多價苗的作了一定的試驗準(zhǔn)備并提供