黃粉蟲纖溶活性蛋白免疫原性與抗血栓作用的研究.pdf

1、黃粉蟲(Tenebrio molitor)又叫面包蟲，隸屬于鞘翅目，擬步行蟲科，粉蟲甲屬。原產(chǎn)北美洲，上世紀(jì)50年代由蘇聯(lián)引進我國。黃粉蟲富含多種營養(yǎng)成分，其干品含蛋白質(zhì)高達(dá)50％以上，被譽為“蛋白質(zhì)飼料寶庫”，此外還富含磷、鉀、鐵、鈉、鋁等常量元素和多種微量元素以及16種氨基酸。鑒于該蟲具有生存能力和適應(yīng)能力強、生長發(fā)育快、養(yǎng)殖成本低等優(yōu)點，日益受到人們的青睞，目前在我國已成為繼養(yǎng)蠶、養(yǎng)蜂業(yè)外的第三大養(yǎng)殖業(yè)。
　　隨著我國人民生

2、活水平的不斷提高，健康長壽已越來越成為人們的迫切需要。研究表明，血栓性疾病是近年來威脅人類健康的最嚴(yán)重疾病之一，其致殘率和死亡率極高，且該病的發(fā)病率與死亡率呈上升的趨勢，因此，預(yù)防血栓形成及血栓病的有效治療對于維護公眾健康，提高人類生存質(zhì)量有著極為重要的意義。
　　幾年來，本實驗室從黃粉蟲體內(nèi)分離純化到一種具有強溶血栓活性的蛋白。本研究期望進一步對該活性蛋白的一系列理化性狀以及免疫原性進行檢測，為將其開發(fā)成為一種高效、安全的治療藥

3、物打下基礎(chǔ)。
　　本研究采用勻漿浸提、硫酸銨分段鹽析、陰離子交換層析等系列生化提取制備技術(shù)，從黃粉蟲幼蟲體內(nèi)分離純化得到一種纖溶活性蛋白(Tenebrio Fibrinolyric Proteins，TFP)，經(jīng)纖維平板法檢測其具有很強的纖溶作用，經(jīng)Brad fore法測得該蛋白濃度為7.7905mg·mL-1，聚丙烯酰胺凝膠電泳測出其相對分子量約為54.3kD。
　　為了探討TFP的免疫原性，本文以小鼠為實驗對象，采用皮下

4、多點注射法進行免疫試驗，取血后分離血清，采用間接ELISA法檢測小鼠血清中的抗體含量及抗體效價。研究結(jié)果顯示黃粉蟲纖溶活性蛋白具有和尿激酶相似的免疫原性，末次免疫后產(chǎn)生的抗體效價為1∶640。說明TFP具有一定的免疫原性。
　　為了研究TFP在體內(nèi)的抗血栓作用，將TFP作用于角叉菜膠所致血栓的小鼠模型和正常小鼠，結(jié)果表明TFP能夠抑制角叉菜膠所致的小鼠尾部血栓的形成，;能明顯延長正常小鼠凝血酶時間(TT)，增強其組織型纖溶酶原激活