

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的: 1.預測E血清型沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MajorOuterMembraneProtein,MOMP)B細胞表位,可為其單克隆抗體的制備及表位疫苗設計等研究提供理論依據(jù)。 2.構建含預測B細胞表位基因的原核重組質(zhì)粒pET32a(+)/CtMOMPP1P2、pET32a(+)/CtMOMPP5P6和pET32a(+)/CtMOMPP7P8并使之在原核表達系統(tǒng)中表達并
2、純化,獲得P1P2、P5P6、P7P8表位融合蛋白,以進一步鑒定其抗原特性。 3.P1P2、P5P6、P7P8融合蛋白免疫小鼠,通過ELISA方法檢測誘導的鼠血清特異性抗體,及其與Ct全菌體的結合能力。為Ct相關疾病的疫苗設計及研制相關診斷試劑奠定基礎。 方法: 1.以E型Ct標準株MOMP的完整氨基酸序列為基礎,采用GOR、Hopp-Woods的親水性方案、Emini表面可及性方案、Jameson-Wolf抗原
3、指數(shù)方案和Janin可及性方案,輔以對MOMP蛋白的二級結構中的柔性區(qū)域及跨膜區(qū)域的分析,預測CtMOMP蛋白的B細胞表位。 2.選取預測的B細胞表位基因序列,按原核系統(tǒng)偏愛的氨基酸密碼子優(yōu)化,委托生物技術公司合成寡核苷酸,退火獲得目的基因,并將目的基因克隆至原核表達載體pET32a(+)多克隆位點內(nèi)。將此重組載體轉化E.coliBL21(DE3)表達融合蛋白,并經(jīng)SDS-PAGE、WesternBlot分析鑒定。用Ni-NTA
4、樹脂親和層析法分別純化表位融合蛋白P1P2、P5P6、P7P8及His蛋白。 3.用純化的蛋白P1P2、P5P6、P7P8作為免疫原,分別于第0w、2w和4w免疫ICR小鼠(9R/組),并以His蛋白和PBS作為陰性對照和空白對照組。于第0w、1w、3w、5w和17w,每組取小鼠尾靜脈血,制備免疫血清抗體。采用間接ELISA方法檢測P1P2、P5P6、P7P8蛋白的免疫原性和抗體效價,及其與Ct全菌體的結合情況。 結果:
5、 1.CtMOMP二級結構的預測均表明,最有可能的B細胞表位位于MOMP蛋白N端第73~81區(qū)段、第161~175區(qū)段、第217~225、第261~270區(qū)段和第377~386區(qū)段內(nèi)或它們的附近。 2.酶切鑒定和核苷酸測序表明,成功構建了3個編碼B細胞表位的原核表達質(zhì)粒。SDS-PAGE分析表明,在37℃1.0mMIPTG作用下誘導6h均能很好地表達目的蛋白,相對分子質(zhì)量(Mr)約為21~22kDa,與預期Mr大小吻合;
6、蛋白表達量均約占細菌總蛋白量的40%。WesternBlot結果顯示單一明顯條帶,與SDS-PACE中位置吻合。用Ni-NTA樹脂親和層析法分別純化得到表位融合蛋白,純度均達95%以上。 3.3種表位融合蛋白免疫ICR小鼠均可獲得高效價的免疫血清。經(jīng)間接ELISA方法檢測:表位融合蛋白均能刺激機體產(chǎn)生抗體;抗體效價隨免疫次數(shù)增加而升高;融合蛋白P5P6(CtMOMP377~386)、P7P8(CtMOMP261~270)鼠免疫血
7、清中含有Ct全菌體的特異性抗體,與對照組有顯著性差異;P1P2(CtMOMP73~81)免疫血清中的抗Ct全菌體特異性抗體與對照組無明顯差異。 結論: 1.預測并篩選了5個可能的CtMOMPB細胞表位。 2.通過分子克隆分別成功構建了3個含B細胞表位的重組質(zhì)粒pET32a(+)/CtMOMPP1P2、pET32a(+)/CtMOMPP5P6和pET32a(+)/CtMOMPP7P8;在原核表達系統(tǒng)內(nèi)分別高效表達了
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 優(yōu)化密碼沙眼衣原體主要外膜蛋白DNA疫苗免疫效果的研究.pdf
- 沙眼衣原體主要外膜蛋白核酸疫苗的構建及其免疫效果的研究.pdf
- E型沙眼衣原體重組主要外膜蛋白多肽疫苗免疫效應的研究與DNA疫苗的比照.pdf
- 溶藻弧菌主要外膜蛋白的免疫原性及其基因克隆.pdf
- 五種血清型的鴨疫里默氏桿菌外膜蛋白特性比較及其免疫原性的研究.pdf
- 副豬嗜血桿菌外膜蛋白表型及免疫原性的初步研究.pdf
- 沙眼衣原體主要外膜蛋白重組質(zhì)粒的構建、表達和活性鑒定.pdf
- 鴨疫里氏桿菌外膜蛋白免疫原性的研究.pdf
- D型沙眼衣原體質(zhì)粒蛋白pgp3的克隆、表達、鑒定及其免疫原性初探.pdf
- 副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus主要外膜蛋白的克隆、表達和免疫原性研究.pdf
- 血清2型鴨疫里默氏菌54KD外膜蛋白免疫原性研究.pdf
- 絲狀支原體山羊亞種膜蛋白的組成與免疫原性研究.pdf
- EBV LMP2 B細胞表位的預測、克隆、表達及其融合蛋白免疫原性的初步研究.pdf
- 禽波氏桿菌外膜蛋白的提取及免疫原性的研究.pdf
- 貝氏柯克斯體外膜蛋白與熱休克蛋白融合蛋白的研制及其免疫原性的研究.pdf
- 兔波氏桿菌免疫原性外膜蛋白和毒力因子的研究.pdf
- 布魯氏菌部分外膜蛋白基因的克隆、表達及免疫原性研究.pdf
- 豬沙門氏菌外膜蛋白的表達及其免疫原性的研究.pdf
- 嗜水氣單胞菌主要外膜蛋白免疫原性分析及其基因克隆與表達.pdf
- 沙眼衣原體E血清型Ⅲ型分泌系統(tǒng)copN基因重組子建立表達和蛋白鑒定.pdf
評論
0/150
提交評論