副豬嗜血桿菌HbpA蛋白功能及其致病中作用的初步研究.pdf

1、近年來副豬嗜血桿菌病呈爆發(fā)流行趨勢，死亡率高達50％，已逐漸成為世界范圍內(nèi)的重要細菌性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。
　　為了探討副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）HbpA蛋白的功能及其在致病中的作用，從新的角度詮釋HPS的毒力特性和感染致病機制，本研究應用免疫蛋白質(zhì)組學技術(shù)，以新發(fā)現(xiàn)的具有免疫原性的HbpA蛋白為切入點，以功能基因組學為理論基礎(chǔ)，從多方面多層次探索了HbpA蛋白生物學功能，研究

2、結(jié)果如下：
　　1、利用蛋白質(zhì)組學技術(shù)和技術(shù)篩選并鑒定得到HPS的一個具有免疫原性的周質(zhì)蛋白HbpA。
　　2、利用基因重組技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-HbpA并誘導表達出可溶性的目的蛋白，大小為59.4kD，PI=7.06。
　　3、利用技術(shù)驗證HbpA蛋白能和鼠源HbpA單抗發(fā)生特異性結(jié)合，證明了HbpA蛋白的特異性。
　　4、利用Heme-agarose法驗證了HbpA蛋白在體外環(huán)境下能Heme結(jié)合，當H

3、bpA的量一定時，HbpA-Heme復合體的分子量在一定的范圍內(nèi)(0mM-4mM)隨Heme濃度的升高而增大;當Heme濃度達到一定限度(4mM)后，HbpA-Heme復合體的分子量將不再增大，而是維持在一個恒定的數(shù)值。
　　5、利用IEM技術(shù)確定野生株HbpA蛋白和Heme的復合體主要存在于細胞外膜，內(nèi)膜和細胞核。
　　6、利用免疫組化技術(shù)直觀的證明了HPS在豬肺臟內(nèi)的確表達出HbpA蛋白。
　　7、通過測定HPS的

4、生長曲線證明了Fe離子是HPS生存、繁殖的重要元素。
　　8、利用抗體體外殺菌技術(shù)證明了在體外環(huán)境下HbpA抗體能殺死近半數(shù)的HPS菌體。
　　9、利用RT-PCR技術(shù)驗證了HPS在Fe離子缺乏的環(huán)境下體內(nèi)HbpA基因表達量是正常培養(yǎng)時的2倍。
　　本研究從分子水平闡明了HbpA蛋白在HPS的存活、繁殖和致病機制方面的功能，并從新的角度詮釋HPS的毒力特性和感染致病機制，對有效的疫苗和藥物阻斷劑的研究具有一定的理論和實