副豬嗜血桿菌病重組亞單位疫苗候選抗原蛋白的免疫保護(hù)效力評(píng)價(jià).pdf

1、副豬嗜血桿菌（H. parasuis）定殖于豬上呼吸道，為一種條件致病菌，急性感染可導(dǎo)致全身性疾病，感染后主要的病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)炎、肺炎、漿膜炎和腦膜炎。對(duì)我國乃至全世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，是目前危害全球養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的細(xì)菌病之一。
　　按照瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和間接血凝試驗(yàn)（IHA）對(duì)H. parasuis進(jìn)行血清分型，H. parasuis至少可分為15個(gè)血清型，但約20％的分離株無法分型。目前，市場上還沒有一種疫苗對(duì)所有血清型的

2、H. parasuis感染都能產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)作用。H. parasuis的一些分泌蛋白和外膜蛋白被認(rèn)為是有效的保護(hù)性抗原，有作為有效疫苗的候選抗原的潛力。最近，本實(shí)驗(yàn)室通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)從H. parasuis血清5型參考菌株Nagasaki中篩選到7個(gè)分泌蛋白（CdtB, CdtC, AfuA, HbpA, OppA, HktE, HPS-04307），為了評(píng)價(jià)上述7個(gè)蛋白用于制備重組亞單位疫苗的潛力，本研究將 cdtB和cdtC

3、基因進(jìn)行了克隆（另5個(gè)蛋白的重組載體已由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建完成），并以His融合蛋白的形式進(jìn)行了表達(dá)和純化。初期以各蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行免疫攻毒試驗(yàn)，從中篩選到5個(gè)保護(hù)作用較好的重組蛋白（rCdtB, rCdtC, rAfuA, rOppA, rHPS-04307），并再次以小鼠模型評(píng)價(jià)了這5個(gè)蛋白混合后的免疫保護(hù)效力。在小鼠模型中，所有蛋白都能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫反應(yīng)并對(duì)血清5型HN10菌株和13型ZD12菌株的H. parasuis攻毒產(chǎn)生不同

4、程度的免疫保護(hù)作用，5個(gè)蛋白混合后對(duì)小鼠的保護(hù)率最高（對(duì)H. parasuis血清5型HN10和13型ZD12菌株的免疫保護(hù)率分別為85%和60%）。此外，全血?dú)⒕鷮?shí)驗(yàn)結(jié)果表明各蛋白的抗血清能夠有效地抑制 H. parasuis的生長，淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果表明各蛋白能夠顯著刺激小鼠 T淋巴細(xì)胞增殖。本研究表明 rCdtB, rCdtC, rAfuA, rOppA, rHPS-04307能夠?qū)χ滤绖┝康腍. parasuis血清5型HN1