豬肌注氟苯尼考的藥動學(xué)-藥效學(xué)研究.pdf

1、藥動學(xué)-藥效學(xué)模型研究是抗菌藥物合理應(yīng)用的基礎(chǔ)，對于全面反映藥物、宿主及微生物三者之間的關(guān)系，評價藥物療效，制定最佳臨床給藥方案具有重要的理論和實際意義。目前對PK-PD模型研究較多的主要有四類藥即β-內(nèi)酰胺類藥、氟喹諾酮類藥、大環(huán)內(nèi)酯類藥和氨基糖苷類藥，而對于氯霉素類，目前還未見報道。氟苯尼考是化學(xué)合成的第三代氯霉素類抗菌藥物，是動物專用廣譜抗菌藥物，它克服了氯霉素具有抑制造血功能及再生障礙性貧血的缺點，同時增強了抗菌效果，其安全性和

2、有效性均比氯霉素和甲砜霉素好。豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌引起的豬的一種高度接觸傳染性呼吸道疾病，是世界性規(guī)?；B(yǎng)豬的重要疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。氟苯尼考是治療豬傳染性胸膜肺炎的首選藥物，臨床上應(yīng)用廣泛，但存在問題是濫用和誤用現(xiàn)象嚴重，而濫用會導(dǎo)致豬胸膜肺炎放線桿菌對氟苯尼考產(chǎn)生耐藥性，從而使臨床治療失敗。藥物的療效與感染部位組織中的藥物濃度直接相關(guān)，組織中要保證得到有效治療濃度，氟苯尼考必須具有很好的組織穿透性

3、，用組織籠考證氟苯尼考的組織穿透性。同時，藥物是通過血液循環(huán)到達病變組織的，并且血清中藥物濃度和豬胸膜肺炎放線桿菌的清除有更好的相關(guān)性。因此，本課題通過研究氟苯尼考對豬胸膜肺炎放線桿菌的體外藥效學(xué)和氟苯尼考在豬體內(nèi)的藥動學(xué)，通過Hill方程把氟苯尼考對豬的藥動學(xué)和藥效學(xué)相結(jié)合，建立起氟苯尼考在豬血清和組織籠液的PK-PD模型，根據(jù)建立好的PK-PD模型來預(yù)測氟苯尼考治療豬胸膜肺炎的合理給藥方案，從而避免耐藥性的發(fā)生，延長氟苯尼考治療豬胸

4、膜肺炎的壽命。 采用微量稀釋法測定氟苯尼考對豬胸膜肺炎放線桿菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。首先制備菌懸液，同時將氟苯尼考待測質(zhì)量濃度設(shè)為128.00、64.00、32.00、16.00、8.00、4.00、2.00、1.00、0.50、0.25、0.125μg/mL，每個質(zhì)量濃度設(shè)三個重復(fù)。通過96微孔板測定最低抑菌濃度和最低殺菌濃度，以目測法找出始變澄清的第一孔，該孔中所含藥物濃度，即為MIC，然后取高濃

5、度液體培養(yǎng)物0.1ml接種于含小牛血清和輔酶1(NAD)的胰酶解大豆酪蛋白胨瓊脂(TSA)平板上，37℃繼續(xù)培養(yǎng)24h，以無菌落出現(xiàn)的最低藥物濃度即為MBC。通過微量稀釋法測得氟苯尼考對豬胸膜肺炎放線桿菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)分別為0.5μg/mL和1μg/mL，表明氟苯尼考對豬胸膜肺灸放線桿菌有很強的殺菌活性。 依據(jù)最低抑菌濃度(MIC)結(jié)果采用1/2MIC、1MIC、2MIC、4MIC、8MIC、1

6、6MIC、64MIC的系列氟苯尼考濃度對豬胸膜肺炎放線桿菌做殺菌實驗，在0、1、2、4、8、12、24h分別吸取0.1mL培養(yǎng)物涂于含有小牛血清和輔酶1的胰酶解大豆酪蛋白胨瓊脂平板上，37℃孵育18h后進行菌落計數(shù)，并以不同時間點菌落數(shù)的常用對數(shù)繪制殺菌曲線。通過殺菌實驗結(jié)果，從殺菌曲線上可明顯看出氟苯尼考隨著濃度的增加，氟苯尼考的殺菌活性增大，表明氟苯尼考屬于濃度依賴性抗菌藥物。 選取5mL塑料離心管，在其表面打孔，制成組織籠

7、，滅菌烘干。選擇20～25kg健康仔豬，以鹽酸普魯卡因進行局部麻醉，于耳后頸部兩側(cè)皮膚以無菌手術(shù)分別切開皮膚形成一2～3cm的小口，露出肌肉，向下方鈍性分離肌肉和皮膚，使肌肉和皮膚之間形成一個空腔，然后植入組織籠并縫合切口。五周后組織籠感染模型建好。以20mg/kg體重肌注氟苯尼考，分別于0、15、30min及1、1.5、2、3、4、6、9、12、15、24、36、48h采集血清并于0、1、3、6、9、12、15、24、36、48h采集

8、組織籠液，用氣相色譜-微電子捕獲檢測技術(shù)測得各點血清和組織籠液中氟苯尼考的濃度。結(jié)果表明：豬肌注氟苯尼考后的血藥經(jīng)時過程和組織籠液經(jīng)時過程均符合一室殲放模型，主要藥物動力學(xué)參數(shù)如下：血清中吸收半衰期T1/2Ka為1.50±0.76h，消除半衰期T1/2Kb為11.16±3.36h，AUC為24.76±5.36h*μg/mL，Tmax為2h，Cmax5.93±1.63μg/mL；組織籠液中穿透半衰期T1/2Kpen為4.62±1.19h，

9、消除半衰期T1/2Kb為17.35±0.57h，AUC為49.09±7.04h*μg/mL，Tmax為12h，Cmax為3.20±0.89μg/mL。從半衰期可以看出氟苯尼考在血清中吸收很快，氟苯尼考從血清中滲透到組織籠中的速度很慢且氟苯尼考在組織籠液中的消除較慢。微量稀釋測定0、1、3、6、9、12、15、24、36、48h的血清和組織籠液的間接殺菌活性。從間接殺菌曲線結(jié)果可知：血清中1、3、6h氟苯尼考有很強的殺菌活性，孵育24h后

10、幾乎所有的細菌部被殺死，9h時氟苯尼考有較弱的抑菌活性，而12、15、24、36、48h的氟苯尼考沒有抑菌活性。組織籠液中氟苯尼考在6、9、12、15、24h氟苯尼考有很強的殺菌活性，孵育24h后幾乎所有的細菌都被殺死，3h時氟苯尼考有較弱的抑菌活性，而1、36、48h的氟苯尼考沒有抑菌活性。 采用WinNonlin軟件對藥動學(xué)和藥效學(xué)數(shù)據(jù)擬合知氟苯尼考在豬體內(nèi)的PK-PD模型為S形Emax模型即Hill模型。通過Hill方程處

11、理exvivoALJC24h/MIC值與抗菌療效之間的關(guān)系，可知血清中AUC24h/MIC為23.69時，開始有抑菌作用，AUC24h/MIC為24.33時能抑制50％的細菌生長，AUC24h/MIC為25.96時能抑制99.9％的細菌生長，AUC24h/MIC為52.33時能夠徹底清除病原菌的生長。在組織籠液中當(dāng)AUC24h/MIC為22.38時開始有抑菌作用，AUC24h/MIC為25.31時能抑制50％的細菌生長，AUC24h/M

12、IC為26.34時能抑制99.9％的細菌生長，AUC24h/MIC為51.64時能夠徹底清除病原菌的生長。利用公式X=d×targettedAUC24h/MIC(exvivo)/AUC24h/MIC(invivo)可知要想取得抑菌效果，臨床最低給藥劑量為10.95mg/kg。 綜上所述，本課題首次闡明了氟苯尼考的PK-PD特性即氟苯尼考屬于濃度依賴性抗菌藥物，具有濃度依賴性抗菌藥物的共性，其PK-PD參數(shù)為AUC/MIC和Cma