副雞禽桿菌指紋圖譜分型及aroA突變株構建.pdf

1、副雞禽桿菌(Avibacteriumparagallinarum，Apg)是巴氏桿菌科的一種短小革蘭氏陰性桿菌，引起雞傳染性鼻炎，目前常用的Apg分型方法都是基于其血凝活性。由于該菌基因組序列未知，所以目前關于副雞禽桿菌相關毒力因子的研究甚少，主要集中在個別基因。
　　 本試驗以腸桿菌基因間共有重復序列(ERIC)和隨機核苷酸多態(tài)性片段(RAPD)為靶序列對副雞禽桿菌基因組進行PCR擴增，對所得指紋圖譜用POPGENE和MEGA

2、4.0軟件進行遺傳距離計算和聚類分析。結果顯示兩種方法均得到豐富、穩(wěn)定的指紋圖譜，其多態(tài)性為85.8％(18/21);10個國際標準株，血清C型疫苗株以及4個國內分離株可分為11個譜型，聚為4類。劃分的11個譜型可以和現有分型方法中不同亞型一一對應，提示這種方法可以區(qū)分不同血清亞型。
　　 本試驗以副雞禽桿菌國際標準株145(C-3)為模板，用CODEHOP軟件設計針對aroA基因的兼并引物，并運用改進的染色體步移技術擴增aro

3、A基因全長序列；對該核酸序列及其編碼蛋白進行結構研究并與該菌其他血清型及相關細菌進行序列比對和分子進化分析。獲得了完整的aroA基因，全長1293bp。該基因編碼430個氨基酸，具有三個跨膜區(qū)和五個潛在抗原表位。不同血清型間氨基酸序列同源性為88.1％-100％，與其他同科細菌核酸同源性為74.2％以上。
　　 此外，我們還利用PCR技術擴增出Apg的C血清型aroA基因上下游大小約0.7kb的基因片段，并在其酶切位點插入大小約