胃癌組織miRNAs的異常表達及其臨床意義.pdf

1、第一部分腸型胃癌miRNA表達譜
　　目的:篩選腸型胃癌組織異常表達的miRNAs。
　　方法:我們采用miRCURYTM Array LNA microRNA chip基因芯片比較腸型胃癌組織和鄰近非腫瘤組織之間差異表達的miRNA,6對配對的病理標(biāo)本均屬于腸型胃癌的TNM分期的Ⅲ期或Ⅳ期。設(shè)定平均上升或下降倍數(shù)大于2倍和p值小于0.01為標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:發(fā)現(xiàn)在40個上調(diào)基因表達的miRNAs中,其中24個基因已證

2、實在胃癌癌組織中異常表達,新發(fā)現(xiàn)異常表達的miRNAs也包括一些最新鑒定的基因如miR-886-5p、miR-1259和miR-1308等。在36個下調(diào)基因表達的miRNAs中,19個miRNAs己報道在胃癌組織中異常表達,在腸型胃癌組織中新發(fā)現(xiàn)了17個miRNAs異常表達以及未知功能的miRNAs等。RT-qPCR結(jié)果顯示,5個表達上調(diào)的miRNAs在29例腸型胃癌腫瘤組織中也異常高表達,;同樣5個表達下調(diào)的miRNAs在腫瘤組織中也

3、呈低表達。對基因芯片與RT-qPCR分析結(jié)果進行Pearson相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)表達上調(diào)的miRNAs其R值為0.98,表達下調(diào)miRNA其R值為0.90,所有10個表達異常miRNAs其R值為0.96。Clustering聚類分析顯示所有76個miRNAs表達模式非常相似,相同的病理分期標(biāo)本歸于同一亞簇。相對于以往的研究,我們在腸型胃癌基因芯片分析中鑒定了更多的miRNAs,也發(fā)現(xiàn)許多新的miRNAs在在腸型胃癌中異常表達。
　　

4、結(jié)論:
　?、偈状螆蟮滥c型胃癌組織miRNA表達譜。
　?、诤Y選了在腸型胃癌組織中76個異常表達的miRNAs,其中43個miRNAs已報道在胃癌或胃癌細胞系中呈異常表達,33個為新發(fā)現(xiàn)在腸型胃癌組織中異常表達的miRNAs。
　?、跼T-qPCR擴增分析確定了本研究miRNAs基因芯片分析的可靠性。
　　第二部分腸型胃癌與彌漫型胃癌組織miRNA表達差異的研究
　　目的:腸型胃癌與彌漫型胃癌存在不同癌變分

5、子機理,分析miRNA表達模式與表達水平在腸型胃癌與彌漫型胃癌組織中是否存在差異。
　　方法:選擇4個在胃癌組織中異常表達的miRNAs,采用RT-qPCR檢測21例配對的彌漫型胃癌組織及癌旁組織與29例配對的腸型胃癌組織及癌旁組織miRNAs的表達水平。
　　結(jié)果:
　　①與配對的癌旁組織比較,miR-27a在彌漫型胃癌組織中增加至癌旁組織的5.54倍,在腸型胃癌組織中的表達水平增加至癌旁組織的3.22倍,雖然兩者均

6、呈現(xiàn)高表達,但在彌漫型胃癌組織中miR-27a表達更高,與腸型胃癌相比,具有顯著性差異。
　?、趍iR-494在腸型胃癌組織與彌漫型胃癌組織中均表達下調(diào),相對癌旁組織,彌漫型胃癌組織中下降至癌旁組織的0.23倍,而在腸型胃癌組織中只下降至癌旁組織的0.43倍,且兩者之間存在統(tǒng)計學(xué)差異。
　?、叟c配對的癌旁組織比較,miR-145在腸型胃癌組織中下調(diào)至癌旁組織的0.34倍,有顯著性差異:但在彌漫型胃癌組織中miR-145表達水

7、平與癌旁組織比無顯著性差異。
　　④miR-886-5p在兩種亞型胃癌組織中均表達上調(diào),在兩種亞型胃癌組織中表達水平相似,統(tǒng)計學(xué)分析兩者無顯著性差異。
　　結(jié)論:miRNAs在兩個亞型癌組織中呈現(xiàn)不同的表達模式與表達水平,這可能與兩種亞型癌不同的病理進程相關(guān)。闡明不同亞型間miRNAs異常表達模型與表達水平的差異,將有助于闡明胃癌癌變的分子機理。
　　第三部分 miRNA的表達水平與腸型胃癌的病理分期相關(guān)。
　　

8、目的:確定miRNAs的異常表達是否與腸型胃癌的惡性演進相關(guān)。
　　方法:選取了4個可能與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNAs,采用RT-qPCR分析其在29例不同病理階段的腸型胃癌組織表達水平的變化。
　　結(jié)果:
　?、倥c癌旁組織比較,miR-32在腸型胃癌Ⅰ期病理標(biāo)本中表達水平明顯上升,但其表達水平比Ⅲ與Ⅳ期病理標(biāo)本相比明顯降低,p值分別是0.0046和0.004。雖然Ⅱ期和Ⅲ期病理標(biāo)本之間miR-32表達水平?jīng)]有明顯差異,

9、但Ⅳ期與Ⅱ期病理標(biāo)本之間存在顯著性地差異。
　?、谂c癌旁組織比較,miR-182在腸型胃癌各期標(biāo)本中均表達上調(diào),但在Ⅰ期病理標(biāo)本與Ⅱ期病理標(biāo)本之間、在Ⅲ期與Ⅳ期病理標(biāo)本之間無顯著性差異,但Ⅰ期&Ⅱ期與Ⅲ期&Ⅳ期病理標(biāo)本之間,具有顯著性差異。
　　⑧與癌旁組織比較,miR-143在Ⅳ期病理標(biāo)本中顯著表達下調(diào),與Ⅰ期&Ⅱ期相比,有明顯差異,p值分別為0.032和0.035。
　　④miR-886-5p在各期腸型胃癌組織中表

10、達下調(diào),但Ⅰ期與Ⅲ期、Ⅰ期與Ⅳ期病理標(biāo)本之間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:miR-32、miR-182和miR-143表達水平的差異與腸型胃癌的病理分期相關(guān),它們可能參與了腸型胃癌惡性演進過程。
　　總之,本研究篩選了一批新的miRNAs在腸型胃癌組織中異常表達,分析了一些miRNAs在腸型胃癌與彌漫型胃癌中表達模式的差異,同時,發(fā)現(xiàn)了miR-32、miR-182和miR-143異常表達水平與腸型胃癌病理分期相關(guān),這些研究將為闡