同種異體骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植治療大鼠肢體缺血的實驗研究.pdf

1、目的：探討同種異體骨髓基質(zhì)細(xì)胞（MSCs）移植對SD大鼠缺血肢體的治療機(jī)制與規(guī)律，為MSCs移植治療肢體缺血提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：體外全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)雄性SD大鼠MSCs至三代制成細(xì)胞懸液，免疫組化鑒定。60只SD大鼠經(jīng)結(jié)扎腹主動脈及雙側(cè)腹壁陰部動脈造成雙下肢缺血模型，隨機(jī)分為對照組（A組n=30）及試驗組（B組n=30），造模后三日渡過反應(yīng)期后實驗組右下肢腓腸肌及股二頭肌內(nèi)分5點注射移植含1×106個MSCs細(xì)胞懸液0.

2、5ml，對照組同法注射生理鹽水0.5ml。按移植后一周、二周、四周、六周、八周隨機(jī)分為10個亞組（n=6），分別取動物麻醉后后穿刺雙側(cè)股靜脈血行血氧分壓測定，處死動物取左前肢，左后、右后肢骨骼肌標(biāo)本4%多聚甲醛固定，制切片。行SRY原位雜交， VEGF-mRNA原位雜交、HE染色，計數(shù)VEGF-mRNA陽性細(xì)胞數(shù)和毛細(xì)血管數(shù)。對照組僅作右后肢的相關(guān)檢測。
　　 結(jié)果：P3細(xì)胞的CD105+為61.9%，CD44+為45.4%，

3、CD29+為16.8%，CD45+為8.2%，CD31+為13.7%， CD34+為8.3%，CD11b+為1.5%。SRY: B組右后肢、左后肢、骨骼肌間間隙內(nèi)有陽性細(xì)胞構(gòu)成血管樣結(jié)構(gòu)，有的在血管周圍，未見到呈陽性的骨骼肌細(xì)胞。左前肢的骨骼肌周圍筋膜內(nèi)偶爾可見到陽性細(xì)胞。VEGF-mRNA原位雜交：對照組和治療組右后肢、左后肢VEGF-mRNA呈進(jìn)行性升高（各組p=0.000），而左前肢則無明顯升高（p=0.694）。在第一周時對照組

4、與治療組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（p=0.065），隨后治療組明顯高于對照組（p=0.000）。靜脈血氧分壓：對照組及治療組股靜脈血氧分壓呈進(jìn)行性升高（p＜0.05），治療組右后肢靜脈氧分壓較左后肢及對照組明顯高（p＜0.05）。毛細(xì)血管計數(shù)：對照組及治療組右后肢、左后肢的毛細(xì)血管計數(shù)呈進(jìn)行性增高（p＜0.05），治療組中右后肢毛細(xì)血管計數(shù)明顯高于左后肢及對照組（p＜0.05）。HE染色：未見明顯組織細(xì)胞核異常分裂改變。
　　 結(jié)論：移