成人腹股溝疝患者腹外斜肌腱膜中基質(zhì)金屬蛋白酶-2及其抑制因子的表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的：
　　 腹股溝疝是一種常見病、多發(fā)病。據(jù)統(tǒng)計(jì),腹股溝疝的發(fā)病率在3～5‰,而在60歲以上男性人群中的發(fā)病率可高達(dá)1～5％。但是,迄今為止,人們還不明了腹股溝疝發(fā)生的確切原因。多年來人們一直認(rèn)為,腹股溝疝是解剖因素及動(dòng)力因素等多方面作用的結(jié)果,即腹股溝管后壁的薄弱或缺損及腹腔內(nèi)壓力升高因素是腹股溝疝發(fā)生的主要原因。
　　 近年來,有學(xué)者提出生物化學(xué)因素。目前一致認(rèn)為:細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular ma

2、trixes,ECM)中Ⅰ型膠原含量下降,Ⅲ型膠原含量相對(duì)增多,Ⅰ/Ⅲ型膠原比例失調(diào),產(chǎn)生結(jié)締組織代謝紊亂,從而導(dǎo)致腹股溝后壁腹橫筋膜薄弱或缺損,最終促使腹股溝疝的發(fā)生,說明膠原代謝與腹股溝疝的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 膠原是ECM的主要成分。其代謝受基質(zhì)金屬蛋白酶(MatrixMetalloproteinase,MMPs)及其抑制劑(Tissue Inhibitors ofMetalloproteinase,TIMPs)的調(diào)節(jié)。M

3、MPs為Zn2+依賴性肽鏈內(nèi)切酶,有廣泛的ECM降解作用。而TIMPs為MMPs天然的特異性抑制因子,能1:1結(jié)合活化的MMP,阻止其與底物結(jié)合,從而間接參與膠原代謝。其中MMP-2主要促使Ⅰ型膠原降解,干擾其合成,而TIMP-2是MMP-2的特異性抑制劑,主要通過阻止MMP-2酶原的活化以及阻止活化MMP-2與底物結(jié)合并發(fā)揮作用,二者相互作用,調(diào)節(jié)ECM中的膠原代謝。
　　 目前對(duì)MMPs和TIMPs在結(jié)締組織中的表達(dá)與腹股溝

4、疝發(fā)生發(fā)展的關(guān)系研究,在國際、國內(nèi)報(bào)道甚少。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈鎖反應(yīng)(Reversetranscript polymerase chainreaction,RT-PCR)技術(shù),分析研究MMP-2(mRNA)及TIMP-2(mRNA)在成人原發(fā)性腹股溝疝患者腹外斜肌腱膜中的表達(dá)與腹股溝疝的關(guān)系,從生物化學(xué)方面來深入探討和完善腹股溝疝的發(fā)病原因,為腹股溝疝的預(yù)防和臨床治療提供依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1.材料

5、:取腹股溝疝患者腹股溝管前壁腹外斜肌腱膜25例(斜疝15例、直疝10例)作為實(shí)驗(yàn)組;再取同期收治的無疝患者腹外斜肌腱膜10例作為對(duì)照組,-80度低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?br>　　 2.試劑來源:TRNzol Reagent試劑、TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒、2×Taq PCR MasterMix試劑盒均購自北京天根生化科技有限公司;特異性引物購自上海生物工程公司。
　　 3.RT-PCR:采用RT-PCR兩步法處

6、理標(biāo)本,實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。多組均數(shù)間的比較采用單因素方差分析;兩樣本均數(shù)間的比較采用t檢驗(yàn);數(shù)據(jù)相關(guān)性分析采用Pearson方法。P值＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.MMP-2(mRNA)和TIMP-2(mRNA)在斜疝組、直疝組及對(duì)照組中的表達(dá)。
　　 MMP-2的表達(dá)斜疝

7、組為0.87±0.20,直疝組1.11±0.17,對(duì)照組0.83±0.23。直疝組呈高表達(dá),與對(duì)照組相比(p=0.008＜0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。斜疝組與對(duì)照組相比(p=0.0616＞0.05)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 TIMP-2的表達(dá)斜疝組0.92±0.19,直疝組0.61±0.16,對(duì)照組1.06±0.21。直疝組呈低表達(dá),與對(duì)照組相比(p=0.000＜0.05)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。斜疝組與對(duì)照組相比(p=0.07＞0.05)無統(tǒng)計(jì)

8、學(xué)意義。
　　 2.MMP-2(mRNA)和TIMP-2(mRNA)表達(dá)與年齡的關(guān)系。
　　 MMP-2的表達(dá)隨著年齡增大而增高,與年齡呈正相關(guān)(r=0.365,p=0.026);
　　 TIMP-2的表達(dá)隨著年齡增大而降低,與年齡呈負(fù)相關(guān)(r=-0.359,p=0.034)。
　　 3.MMP-2(mRNA)和TIMP-2(mRNA)表達(dá)與吸煙的關(guān)系。
　　 MMP-2的表達(dá),非吸煙組(16例)

9、為0.829±0.198,吸煙組(19例)為1.008±0.213。吸煙組與非吸煙組相比為高表達(dá)(t=6.782 p=0.013＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 TIMP-2的表達(dá),非吸煙組為0.983±0.246,吸煙組為0.800±0.207,吸煙組與非吸煙組相比為低表達(dá)(t=5.557 p=0.024＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.腹股溝疝患者腹外斜肌腱膜ECM中MMP-2呈