膠原的性質(zhì)與姜黃素膠原微球的制備及質(zhì)量研究.pdf

1、膠原是蛋白質(zhì)中的一種，主要存在于動(dòng)物的皮、骨、軟骨、肌腱等組織中，是一種天然高分子物質(zhì)。膠原蛋白具有生物可降解性，生物相容性和低的免疫原性；且其分子通過(guò)自聚和交聯(lián)，可形成具有一定強(qiáng)度的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，所以可制備成多種形式的藥物載體系統(tǒng)，是最為理想的生物載體材料。 姜黃素是從姜科姜黃屬植物姜黃、莪術(shù)、郁金等的根莖中提取出的一種天然有效成分。這種黃色略帶酸性的酚類(lèi)物質(zhì)來(lái)源廣泛，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降脂、抗病毒與提高免疫力等廣泛的藥理

2、作用，是一種安全有效的藥物，具有良好的臨床應(yīng)用前景。但國(guó)內(nèi)對(duì)其制劑研究有限，目前的劑型以片劑、膠囊劑為主，新劑型較少；且姜黃素對(duì)光、熱不穩(wěn)定，在體內(nèi)經(jīng)肝腸循環(huán)易被代謝，口服的生物利用度非常低。 故選用膠原作載體材料，將姜黃素用膠原包載，通過(guò)乳化縮聚法制備成一種緩控釋靶向給藥新劑型-微球，以提高姜黃素在體內(nèi)的生物利用度，達(dá)到最佳治療效果。 首先，對(duì)膠原蛋白這種新型藥物載體的提取、純化與鑒定做了較全面的研究。 以新鮮

3、大鼠鼠尾肌腱為原材料，加入含1MNaCl的0.05MTri/HCL(PH7.5)溶液進(jìn)行前處理，除去雜質(zhì)。再將肌腱于0.5M的乙酸溶液中4℃浸泡提取，靜置4天，每天定時(shí)攪拌6次。得到的混合液用高速冷凍離心機(jī)離心，取上清液即為粗提膠原液。再經(jīng)過(guò)鹽析，離心取沉淀，三蒸水透析并再次離心即得到精制膠原液，并用紫外吸收法測(cè)定其濃度。 采用紫外掃描法測(cè)定膠原液與Ⅰ型膠原蛋白標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的最大吸收波長(zhǎng)，結(jié)果相同，均為205nm。再對(duì)這兩者采用

4、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法進(jìn)行研究，結(jié)果顯示膠原液與Ⅰ型膠原蛋白標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的特征譜帶基本相同，測(cè)得膠原分子量為100000，97400，43000，31623。接著采用等電聚焦電泳法，得到膠原液的一條特征譜帶，其等電點(diǎn)為4.90。最后采用磷酸緩沖鹽檢測(cè)，膠原液凍干品在4℃下呈液態(tài)，在37℃下呈固態(tài)，這一性質(zhì)與膠原蛋白性質(zhì)相符。以上鑒定結(jié)果表明，所提取的膠原液具有較高的純度。 然后，取姜黃素單體藥物，采用乳化縮聚法制備姜黃素膠

5、原微球。制備工藝研究以膠原水溶液濃度，藥物與膠原的質(zhì)量比，乳化時(shí)間，乳化溫度為四因素，各取三水平，以微球的載藥量和包封率為考察指標(biāo)，進(jìn)行正交分析。確定最佳工藝是：稱(chēng)取膠原蛋白凍干品2.5g，溶于10ml雙蒸水中。稱(chēng)取1.25g姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品，加入其中，攪拌使其均勻分散，40℃的水浴保溫，制成A混懸液。在小錐形瓶?jī)?nèi)，加入40ml液體石蠟與0.5gSpan80，在磁力攪拌器上混合均勻，40℃的水浴保溫，制成B液。將A液勻速緩慢滴入到B液中，邊

6、滴邊使用磁力攪拌器攪拌，制成油包水型乳化劑。乳化50min后，轉(zhuǎn)入冰水浴中繼續(xù)用磁力攪拌器攪拌40min，然后加入異丙醇攪拌10min，再加入戊二醛固化10min，抽濾。所得沉淀物分別用異丙醇，乙醚，無(wú)水乙醇洗滌3次，40℃干燥，過(guò)篩，收集粒徑小于100目的微球。 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究以甲醇為提取溶劑，采用研磨提取法，利用高效液相色譜法測(cè)定姜黃素膠原微球的載藥量和包封率。色譜條件為：流動(dòng)相：甲醇-0.6％乙酸(75：25)，流速：1.0