在A549細胞中重組表達具有EGFP標簽的抑癌因子LKB1及對細胞生長和p53蛋白水平的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：LKB1是關鍵抑癌因子，其編碼基因的缺陷可導致LKB1蛋白的表達或者活性缺失，這與錯構瘤性息肉的發(fā)生及多種器官癌變密切相關。重建LKB1的表達則可對腫瘤細胞產(chǎn)生生長抑制效應。探討LKB1在細胞中的定位對研究其功能有重要作用。因此，本研究在人肺腺癌細胞A549中表達具有EGFP熒光標簽的重組LKB1，并探討重建LKB1表達對于A549細胞的生長抑制效應。
　　 方法：應用PCR方法擴增LKB1蛋白編碼基因全長cDNA序列，并

2、利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-LKB1和pEGFP-N1質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染A549細胞。分別在轉(zhuǎn)染12h，24h，36h，48h，60h，72h時，用MTT法檢測LKB1對A549細胞的影響；并用Western blot檢測LKB1和p53在A549細胞中的表達量變化。
　　 結(jié)果：成功構建pEGFP-N1-LKB1重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染A549細胞。在轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-LKB1和pEGFP-N1的A549細胞中觀察到綠色

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