梔子豉湯改善Ⅱ型糖尿病大鼠胰島素抵抗的機(jī)制研究.pdf

1、目的:梔子豉湯為《傷寒論》治療“虛煩”而又“心中懊惱”的名方,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)梔子、淡豆豉均有降低血糖,改善糖耐量的作用,關(guān)于梔子豉湯的相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用胰島素抵抗大鼠模型,通過(guò)觀察胰島素抵抗大鼠肝組織胰島素受體表達(dá)變化及影響胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)因素的變化。在整體與分子水平探討梔子豉湯改善2型糖尿病胰島素抵抗的部分分子機(jī)制,并通過(guò)觀察自發(fā)性高血壓大鼠血壓及血管緊張素Ⅱ1型受體表達(dá)的變化,初步探討梔子豉湯對(duì)血管緊張素Ⅱ影響胰

2、島素轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而致胰島素抵抗的作用。為古方新用提供了理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1梔子豉湯對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響
　　 采用小劑量鏈脲佐菌素加高脂飼料方法建立Wistar大鼠2型糖尿病經(jīng)典模型。依血糖值隨機(jī)分為五組:模型對(duì)照組,梔子豉湯低劑量組(4g生藥/kg),梔子豉湯中劑量組(8g生藥/kg),梔子豉湯高劑量組(16g生藥/kg)及陽(yáng)性藥羅格列酮組(1.8mg/kg.d),另取10只Wist

3、ar大鼠做為空白對(duì)照組,給予常規(guī)飼料喂養(yǎng)。空白對(duì)照組與模型對(duì)照組灌服蒸餾水。給藥(水)容量為10mL/kg,連續(xù)給藥8周,末次給藥后禁食十二小時(shí),取血、胰腺、肝臟進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。
　　 1.1血液生化檢測(cè):斷頭取血,低溫離心,分離血清,檢測(cè)空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、血清胰島素(FINS)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等,由公式ISI=ln[1/(FPG×FIN

4、S)]計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)。
　　 1.2胰腺組織形態(tài)學(xué)檢測(cè):取胰腺組織10％甲醛固定,石蠟切片,HE染色制片觀察胰腺組織形態(tài)的變化。
　　 1.3肝細(xì)胞膜胰島素受體(InsR)mRNA定量分析:迅速取出肝臟,RT-PCR法測(cè)定肝組織InsR mRNA的表達(dá)。
　　 2梔子豉湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體表達(dá)的影響
　　 選取SHR大鼠50只,依據(jù)血壓隨機(jī)分為五組,模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥卡托

5、普利組(2mg/kg)、梔子豉湯低劑量組(4g生藥/kg)、梔子豉湯中劑量組(8g生藥/kg)、梔子豉湯高劑量組(16g生藥/kg),給藥容量10mL/kg,連續(xù)給藥28天,分別于第7天、14天、21天、28天測(cè)量每只大鼠的血壓值。
　　 2.1梔子豉湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響
　　 采用BESN-Ⅱ多通道動(dòng)物無(wú)創(chuàng)測(cè)壓系統(tǒng)測(cè)定各組動(dòng)物的收縮壓值。
　　 2.2主動(dòng)脈AT1R mRNA表達(dá)水平檢測(cè)
　　

6、 Trizol法提取主動(dòng)脈組織總RNA,RT-PCR法測(cè)定主動(dòng)脈AT1R mRNA的表達(dá)。
　　 2.3心肌組織AT1R mRNA表達(dá)水平檢測(cè)
　　 Trizol法提取心肌總RNA,RT-PCR法測(cè)定心肌AT1R mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1梔子豉湯對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響
　　 1.1對(duì)血液生化指標(biāo)的影響
　　 1.1.1對(duì)FPG、HbAlc水平的影響:模型對(duì)照組FP

7、G及HbAlc水平較空白對(duì)照組顯著升高(P＜0.01),各給藥組較模型對(duì)照組有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05);
　　 1.1.2對(duì)FINS水平、ISI的影響:模型對(duì)照組FINS較空白對(duì)照組顯著升高(P＜0.01);梔子豉湯組低、中、高劑量組及陽(yáng)性藥組FINS較模型對(duì)照組顯著降低(P＜0.01)。模型對(duì)照組ISI較空白對(duì)照組顯著降低(P＜0.01);各給藥組較模型對(duì)照組ISI明顯升高(P＜0.01);
　　

8、1.1.3對(duì)TNF-α水平的影響:模型對(duì)照組TNF-α水平較空白對(duì)照組顯著升高(P＜0.01);梔子豉湯組低、中、高劑量組及陽(yáng)性藥組TNF-α水平較模型對(duì)照組明顯降低(P＜0.01);
　　 1.1.4對(duì)SOD活性、MDA水平的影響:模型對(duì)照組SOD水平較空白對(duì)照組顯著降低(P＜0.01),梔子豉湯中、高劑量組及陽(yáng)性藥組SOD較模型對(duì)照組有明顯的升高(P＜0.01或P＜0.05),梔子豉湯低劑量組較模型對(duì)照組有升高的趨勢(shì),但無(wú)顯

9、著差異(P＞0.05)。模型對(duì)照組MDA含量較空白對(duì)照組明顯升高(P＜0.01),梔子豉湯各劑量組及陽(yáng)性藥組MDA含量較模型對(duì)照組顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 1.2胰腺組織形態(tài)學(xué)檢查
　　 模型對(duì)照組較空白對(duì)照組胰島明顯萎縮,部分胰島細(xì)胞胞漿內(nèi)有空泡變性,細(xì)胞核固縮,視野中胰島數(shù)量顯著下降,體積縮小。梔子豉湯中、高劑量組及陽(yáng)性藥組較模型組胰島細(xì)胞數(shù)量有明顯增多,空泡明顯減少,并且視野中胰島組織完整,島

10、形飽滿,境界清晰。
　　 1.3對(duì)肝組織InsR mRNA表達(dá)水平的影響
　　 模型對(duì)照組InsR mRNA表達(dá)較空白對(duì)照組明顯降低(P＜0.01);與模型對(duì)照組相比較,梔子豉湯各劑量組及羅格列酮組InsR mRNA表達(dá)明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 2梔子豉湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠AT1 mRNA表達(dá)的影響
　　 2.1對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響
　　 梔子豉湯低劑量組血壓較模型對(duì)

11、照組有降低趨勢(shì),但無(wú)顯著差異(P＞0.05),梔子豉湯中、高劑量組及卡托普利組血壓較模型對(duì)照組顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 2.2對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈AT1R mRNA表達(dá)的影響
　　 與模型對(duì)照組比較,梔子豉湯中劑量組、高劑量組及卡托普利組AT1RmRNA表達(dá)明顯降低(P＜0.01),梔子豉湯低劑量組AT1R表達(dá)水平下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.3對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌

12、AT1R mRNA表達(dá)的影響
　　 與模型對(duì)照組比較,梔子豉湯各劑量組及卡托普利組AT1R mRNA表達(dá)不同程度的下降(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1梔子豉湯可降低FPG、HbAlc、FINS水平,改善2型糖尿病大鼠胰腺組織的損傷,具有提高胰島素敏感性,改善胰島素抵抗的作用。
　　 2梔子豉湯改善胰島素抵抗作用可能與上調(diào)肝臟胰島素受體InsR mRNA的表達(dá)有關(guān)。
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