NADPH氧化酶在糖尿病腎病系膜外基質(zhì)沉積中的作用.pdf

1、目的：探討高糖環(huán)境下NADPH氧化酶表達和活性的改變，并研究NADPH氧化酶在系膜基質(zhì)沉積中的作用，初步探討NADPH氧化酶導(dǎo)致的氧化應(yīng)激在糖尿病腎病發(fā)病機制中的作用。 方法：1、高糖體外培養(yǎng)系膜細胞，以RT一PCR方法檢測不同作用時間細胞內(nèi)NADPH氧化酶亞基p22phox的mRNA表達，并以DCFH—DA和HE標記細胞內(nèi)活性氧，流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)活性氧表達，觀察高糖對NADPH氧化酶表達和活性的影響。2、高糖體外培養(yǎng)系膜細

2、胞，選取FN、PAl一1、MMP一2反映基質(zhì)合成和降解，RT一PCR方法檢測，并應(yīng)用NADPH氧化酶特異性抑制劑DPI、抗氧化酶、抗氧化劑抑制NADPH氧化酶，觀察其對系膜細胞基質(zhì)合成和降解的影響。 結(jié)果：1、細胞內(nèi)NADPH氧化酶的活性隨著外周葡萄糖濃度的升高和作用時問的延長而上升，而NADPH氧化酶亞基p22phox則無此現(xiàn)象，其mRNA表達只有在高糖作用一定的時間(5天)后才明顯升高，不同高糖濃度引起的上升程度沒有明顯的差

3、異。2、隨著NADPII氧化酶活性升高，系膜細胞內(nèi)FN、PAI一1表達增多，MMP一2表達減少，應(yīng)用特異性抑制劑DPI后細胞基質(zhì)合成和降解的失衡得到了糾正；超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(cat,a]ase)、N一乙酰半胱氨酸(NAC)等不同水平抑制NADPH氧化酶后，結(jié)果顯示NADPH氧化酶通過超氧陰離子和過氧化氫影響基質(zhì)沉積。 結(jié)論：l、高糖可激活系膜細胞內(nèi)NADPH氧化酶表達增多、活性升高。2、NAOPH氧化酶通過超