晚期氧化蛋白產(chǎn)物與NADPH氧化酶途徑在膜性腎病大鼠發(fā)病機(jī)制中的初步研究.pdf

1、目的:探討在C-BSA誘導(dǎo)的膜性腎病大鼠發(fā)病過程中，晚期氧化蛋白的產(chǎn)生情況及其對MN大鼠腎組織損傷機(jī)制的初步探索。
　　方法:將80只SD雄性大鼠隨機(jī)分成正常組（A組）、模型組（B組）、模型+夾竹桃麻素組(C組)、夾竹桃麻素組（D組），每組20只;B、C組按改良的Border法[1]予以造模，C、D組在正式免疫時(shí)即開始予以夾竹桃麻素200 mg/kg.d灌胃，正常組予以相應(yīng)的生理鹽水刺激。于正式免疫第1、2、3、4周末，各組各隨機(jī)

2、選取5只大鼠處死，處死前一天收集24小時(shí)尿行24hUTP及Elisa檢測法檢測尿中AOPP、PCX水平;心臟采血離心上清液行ALB、BUN、Scr、TC、TG檢測及Elisa法檢測血清中AOPP水平、分光光度法檢測血清中MDA、SOD的表達(dá)水平;取腎組織皮質(zhì)部分約2×3 mm用生理鹽水浸濕紗布包裹，予以O(shè)CT試劑包埋后立即冰凍切片，行免疫熒光染色，熒光顯微鏡置于暗室中觀察免疫復(fù)合物沉積情況，左腎予以固定、脫水、包埋等過程制成蠟塊，再行石

3、蠟切片，行HE、Masson及PSAM染色，光學(xué)顯微鏡觀察病理改變情況，剩余腎組織凍存于-80℃冰箱備檢，Elisa法檢測腎組織中AOPP、ROS水平、免疫組化檢測WT-1表達(dá)水平。各個(gè)檢測指標(biāo)在同一時(shí)間點(diǎn)，各組間行獨(dú)立樣本的單因素方差分析，P≤0.05為差異有顯著意義，指標(biāo)間的相關(guān)性行Person相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:(1)腎臟形態(tài)改變A、D組各時(shí)間點(diǎn)腎臟顏色、形態(tài)正常，腎組織無明顯病理改變，也無IgG熒光沉積;B、C組于第1

4、周末顏色及形態(tài)未見明顯異常，但隨著造模時(shí)間的延長多數(shù)腎臟可見體積增大、顏色變蒼白，呈“大白腎”樣改變，隨著造模時(shí)間的延長，逐漸可見基底膜彌漫性增厚，部分囊腔狹窄，嗜復(fù)紅物沉積，綢帶樣改變，“雙軌癥”及“釘突”形成等改變，上述病理改變C組較B組輕微;免疫熒光染色在B、C兩組第1周末就可見明顯的顆粒沉積，熒光強(qiáng)度+++-++++，隨著造模時(shí)間的延長未見明顯增強(qiáng)，且兩組間熒光強(qiáng)度無明顯差異。(2)臨床指標(biāo)的變化A、D兩組各時(shí)間點(diǎn)24hUTP、

5、ALB、BUN、Scr、TC、TG都無明顯差別;B、C兩組24hUTP從第1周開始就明顯高于A、D組，直至第4周末B、C組持續(xù)升高，但C組較B組低;B、C組ALB從第2周末開始下降，B組較C組更低;在第4周末，與A、D組比，B、C組BUN、Scr、TC、TG水平都有明顯升高，與B組比較，C組可見BUN水平明顯下降，但Scr、TC、TG都未見明顯下降。(3)血清中AOPP、SOD、MDA的動(dòng)態(tài)表達(dá)各指標(biāo)在A、D組隨著造模時(shí)間延長未見明顯增

6、減，兩組間的表達(dá)水平也無明顯差異;B組血清中AOPP、MDA、SOD的平均值水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于A、D兩組，AOPP、MDA的水平呈上升趨勢，SOD水平隨著造模時(shí)間的延長呈下降趨勢，AOPP、SOD從第1周末起與A、D組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≤0.05），MDA從第2周末起與A、D組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.05);C組血清中AOPP、SOD及MDA平均值水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均大于A、D兩組，但小于B組的表達(dá)水平，AOPP至第4周末與B

7、組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.05)，MDA從第3周末開始兩組間差異既有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.05)，而SOD在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異不明顯。(4)尿液中AOPP、PCX的動(dòng)態(tài)表達(dá)A、D組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)AOPP、PCX水平無顯著變化，兩組之間無明顯差異;B、C組尿液中AOPP的水平明顯較A、D兩組升高(P≤0.05)，且在B組中呈上升趨勢，C組表達(dá)水平平均值在各時(shí)間點(diǎn)均小于B組，但差異不明顯;B、C組尿液中PCX的表達(dá)水平在第1、2周呈上升趨勢，

8、且明顯高于A、D組，至第3、4周的表達(dá)水平較前兩周下降，C組PCX水平在前3周明顯低于B組(P≤0.05)，在第4周末差異不明顯。(5)腎組織中AOPP、ROS、WT-1的動(dòng)態(tài)變化A、D組腎組織AOPP、ROS、WT-1的表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)無顯著變化，且兩組之間無明顯差異;B、C組AOPP、ROS的表達(dá)水平呈上升趨勢，從第2周末開始明顯高于A、D組，C組AOPP水平除第2周明顯低于B外，其余時(shí)間點(diǎn)差異不明顯，而C組ROS水平從第2周末開始

9、明顯低于B組（P≤0.05）;B、C組中WT-1半定量水平明顯低于A、D兩組（P＜0.05），且呈下降趨勢，但C組表達(dá)水平較B組高。(6)模型組血清、尿液中AOPP的表達(dá)水平的比較AOPP在血清、尿液中的表達(dá)水平呈時(shí)間依賴性增高;尿液中AOPP均值水平高于血清中的表達(dá)水平，前3周差異特別明顯（P≤0.05），至第4周末差異不明顯。(7)各指標(biāo)的相關(guān)性分析血清中AOPP與MDA呈正相關(guān)，與SOD呈負(fù)相關(guān);腎組織中AOPP與24hUTP、R

10、OS呈正相關(guān)，與WT-1呈負(fù)相關(guān)，ROS與24hUTP呈正相關(guān)，與WT-1呈負(fù)相關(guān)，WT-1與24hUTP呈負(fù)相關(guān);尿中PCX與AOPP、ROS、WT-1、24hUTP都無明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:(1)在MN大鼠模型中，全身及腎臟局部都存在逐漸加重的氧化應(yīng)激反應(yīng)，AOPP可作為機(jī)體氧化應(yīng)激指標(biāo)之一;(2) MN大鼠腎臟的氧化應(yīng)激反應(yīng)是導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的原因之一;(3) AOPP可能是通過激活NADPH氧化酶途徑誘導(dǎo)足細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)