針刺調(diào)節(jié)血壓的NADPH氧化酶-ROS途徑研究——基于自發(fā)性高血壓大鼠的實驗研究.pdf

1、氧化應(yīng)激和高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，降低氧化應(yīng)激水平能顯著改善血壓。針灸治療能改善血壓及相關(guān)臨床癥狀，但其作用機制仍不明確。
　　目的：
　　針刺治療SHR模型大鼠2周，采用DHE染色法、光澤精化學(xué)發(fā)光法、Western blotting和PCR等方法，明確針刺對SHR大鼠NADPH氧化酶的影響，闡明針刺改善SHR大鼠血壓的機制，從而揭示針灸的抗氧化機制，為高血壓的治療提供新的思路。
　　方法：
　　1.高血壓模

2、型制備：SHR大鼠72只，隨機分為模型組、針刺組和非穴組；24只WKY大鼠作為正常組。
　　2.針刺方法：針刺組，取雙側(cè)太沖穴(定位在大鼠后肢足背側(cè)第1、2跖骨間)，行捻轉(zhuǎn)瀉法(捻轉(zhuǎn)角度>180度，每分鐘<60次)。非穴組取固定非穴點(定位在大鼠后肢足背側(cè)第3、4跖骨間凹陷處)，作為對照刺激點，用平補平瀉手法(捻轉(zhuǎn)角度90-180度，每分鐘60-120次)。每日1次，每次30s，不留針，治療6 d，休息1 d，2周共治療12次。模

3、型組和正常組進行與針刺組和非穴組相同時間、相同力度的捉抓刺激。
　　3.血壓和心率檢測：采用無線遙測技術(shù)測量大鼠的血壓和心率。
　　4.ROS水平測定：采用DHE染色方法檢測延髓頭端腹外側(cè)中ROS水平。
　　5.NADPH氧化酶活性測定：采用光澤精化學(xué)發(fā)光法檢測NADPH氧化酶活性。
　　6.NADPH氧化酶亞基測定：采用Western blotting和PCR檢測NADPH氧化酶質(zhì)膜亞基和胞漿亞基蛋白和mRNA

4、表達水平。
　　7.統(tǒng)計學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)都以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。血壓、心率數(shù)據(jù)采用重復(fù)測量的雙因素方差分析，各組即刻效應(yīng)的比較采用配對t檢驗，各時間點組間兩兩比較用多元方差分析；其他數(shù)據(jù)組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)；p<0.05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.針刺可以下降SHR大鼠的血壓和心率：與正常組比較，模型組SHR大鼠血壓顯著升高，心率顯著加快(p<0.01)；與模型組

5、和非穴組比較，針刺下降SHR大鼠的血壓和心率(p<0.05)。
　　2.針刺可以降低ROS含量：與正常組比較，模型組ROS熒光強度顯著升高；與模型組和非穴組比較，針刺組延髓頭端腹外側(cè)ROS熒光強度顯著減弱(p<0.01)。
　　3.針刺可以降低NADPH氧化酶活性：與正常組比較，模型組大鼠NADPH氧化酶活性顯著升高；與模型組和非穴組比較，針刺組大鼠NADPH氧化酶活性顯著降低(p<0.05)。
　　4.針刺可以下調(diào)N

6、ADPH氧化酶亞基gp91phox表達：與正常組比較，模型組大鼠NADPH氧化酶胞膜和胞質(zhì)亞基蛋白表達顯著升高(p<0.05)；與模型組和非穴組比較，針刺下降大鼠胞膜亞基gp91phox蛋白表達(p<0.05)；與模型組比較，非穴組gp91phox蛋白表達未見顯著改變。與正常組比較，SHR大鼠NADPH氧化酶亞基gp91phox mRNA水平顯著升高；與模型組和非穴組比較，針刺下降gp91phox mRNA表達水平(p<0.05)；模型

7、組和非穴組比較無顯著差異(p>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.SHR大鼠血壓升高，心率加快，針刺可以下降高血壓大鼠血壓和心率。
　　2.SHR大鼠ROS水平顯著增加，NADPH氧化酶活性顯著升高，針刺可以降低自發(fā)高血壓大鼠ROS水平和NADPH氧化酶活性。
　　3.SHR大鼠延髓頭端腹外側(cè)NADPH氧化酶多種亞基表達上調(diào)，針刺可以顯著下調(diào)gp91phox的表達水平。
　　綜上所述，高血壓大鼠血壓升高、心率