自發(fā)性高血壓大鼠新的高血壓相關(guān)基因—hsp70.2的實(shí)驗(yàn)研究

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文自發(fā)性高血壓大鼠新的高血壓相關(guān)基因—HSP70.2的實(shí)驗(yàn)研究姓名：余祖善申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（心血管）指導(dǎo)教師：楊德業(yè);張懷勤20070501溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文自發(fā)性高血壓大鼠額的高血壓相關(guān)基因- - H S P 7 0 ．2 的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的：從1 3 周齡的自發(fā)性高血壓大鼠( S p o n t a n e o u s l y H y p e r t e n s i v eR a t s 。

2、S H R )和正常血壓大鼠( W i s t a r —K y o t o 。W K Y ) 的阻力血管( 腸系膜動脈第二、三級分支) 和腎臟組織中提取總R N A ，與含1 0 ，0 0 0 個(gè)基因及E S T 片斷的S B C —R —R C —l O o _ 1 3大鼠表達(dá)芯片進(jìn)行雜交，找出差異表達(dá)的基因，并經(jīng)R T - P C R 和r e a l - t i m eR T - P C R初步篩選出高血壓新的相關(guān)基因。為進(jìn)一步

3、了解高血壓病的分子機(jī)制提供新的思路和線索。方法：( 1 ) 取1 3 周齡的雄性S H R 和W K Y 各3 只，分為S H R 和W K Y 組。以0 ．5 ％戊巴比妥腹腔麻醉后，用M e d L a bV5 ．0 生物信號采集處理系統(tǒng)記錄頸動脈血壓，取阻力血管( 腸系膜動脈第二、三級分支) 和腎臟一7 0 “ C 冷凍保存?zhèn)溆?，提取S H R 和W K Y 的腸系膜動脈和腎臟的總R N A 。經(jīng)R N A 電泳和分光光度計(jì)進(jìn)行總R

4、 N A的質(zhì)量鑒定后，將同組的3 只大鼠的腸系膜動脈和腎臟的總R N A 等比例混合。逆轉(zhuǎn)錄法將C y 3 一d U T P 標(biāo)記S H R 組c D N A ；C y 5 一d U T P 標(biāo)記W K Y 組e D N A ，然后與含1 0 ，0 0 0個(gè)基因的S B C —R - R C - 1 0 0 - 1 3 大鼠表達(dá)芯片雜交，洗滌。A g i l e n tG 2 6 5 5 A A 掃描芯片，用G e n e s p r

5、i n g 分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，篩選出在S H R 表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的基因。( 2 ) 選取芯片篩選出有表達(dá)差異的5 個(gè)基因，設(shè)計(jì)特異的P C R 引物，用R T —P C R初步篩選排除假陽性。再設(shè)計(jì)特異的實(shí)時(shí)R T - P C R 引物，并經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確保沒有雜帶等。用嵌合熒光法( S Y B RG r e e n I ) 實(shí)時(shí)R T —P c R 進(jìn)一步證實(shí)陽性基因表達(dá)的m R N A 水平。結(jié)果：測血壓S H R 組血壓( 2 2 5 4