自發(fā)性高血壓大鼠慢性腦損害以及藥物的影響.pdf

1、隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展和人們快節(jié)奏的生活方式，高血壓等慢性疾病呈現(xiàn)出多發(fā)、常見(jiàn)、低齡化的態(tài)勢(shì)，人群中高血壓病的存在更加普遍。高血壓病嚴(yán)重危害人類(lèi)的健康，它是多種心、腦血管疾病的重要病因和危險(xiǎn)因素，長(zhǎng)期持續(xù)的高血壓可對(duì)血管產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，造成血管損害，病理學(xué)上表現(xiàn)為內(nèi)膜彈性纖維增生，中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大，并在一定程度上伴有膠原纖維和彈性纖維的增生，其結(jié)果就是血管壁增厚而造成血管腔狹窄，血管彈性減弱，如此又可進(jìn)一步使血壓情況惡化。腦部血管因

2、為管腔狹窄會(huì)導(dǎo)致腦部供血減弱，進(jìn)而使腦部缺氧，長(zhǎng)此以往會(huì)改變腦組織的結(jié)構(gòu)和損害其功能，發(fā)生神經(jīng)生理學(xué)上的改變。
　　當(dāng)高血壓持續(xù)時(shí)，機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)可增強(qiáng)，大量的實(shí)驗(yàn)研究表明高血壓與氧化應(yīng)激之間存在緊密的聯(lián)系。正常時(shí)，活性氧簇(ROS)保持在較低水平，高血壓會(huì)改變這種常態(tài)，使活性氧簇顯著增多，打破機(jī)體氧化和抗氧化之間維持的平衡，自由基的生成增多，心臟、腎臟、腦等各個(gè)器官會(huì)因高血壓而形成損害。
　　高血壓與晚期糖基化終末產(chǎn)物

3、(AGEs)也有著密切的聯(lián)系，AGEs是機(jī)體內(nèi)還原糖（葡萄糖）與蛋白質(zhì)、脂肪、核酸等的醛基之間發(fā)生不可逆反應(yīng)（非酶性糖基化反應(yīng)也即Maillard反應(yīng)）所形成的產(chǎn)物，在高血壓、糖尿病等慢性疾病時(shí)，AGEs會(huì)在體內(nèi)積聚而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性。AGEs具有高度活性，其可以通過(guò)直接修飾蛋白質(zhì)、脂肪以及核酸，結(jié)合晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體集聚毒性反應(yīng)，直接或者間接地參與到心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中。AGEs和RAGE在細(xì)胞表面結(jié)

4、合之后通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增加氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎性反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)機(jī)體各器官造成損害。AGEs和RAGE的結(jié)合通過(guò)增加活性氧簇來(lái)激活核因子-κB(NF-κB)，而在產(chǎn)生NF-κB的反應(yīng)中，需要羧甲基賴(lài)氨酸修飾的人血清蛋白(CML-HAS)的介導(dǎo)，羧甲基賴(lài)氨酸(CML)是AGEs的主要成分之一。
　　血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)是于2000發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)血壓的新的關(guān)鍵因子，它對(duì)高血壓的發(fā)生發(fā)展有重要影響，通過(guò)增加一氧化氮(NO)的釋放和減少氧化應(yīng)激

5、而使血管舒張從而對(duì)抗血管緊張素Ⅱ的縮血管作用。若通過(guò)增加ACE2也可以降低機(jī)體內(nèi)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的活性，減少活性氧簇的形成，降低氧化應(yīng)激反應(yīng)對(duì)靶器官的損害。
　　目的:
　　1、觀(guān)察自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)腦組織氧化應(yīng)激指標(biāo)（超氧化物歧化酶和一氧化氮）的變化情況。
　　2、觀(guān)察高血壓時(shí)大鼠腦組織中CML、RAGE、炎性因子和轉(zhuǎn)錄因子NF-κB等指標(biāo)的表達(dá)。
　　3、探討培哚普利

6、(Perindopril)以及替米沙坦(Telmisartan)干預(yù)后對(duì)高血壓大鼠對(duì)上述指標(biāo)的影響。
　　4、初步探討晚期糖基化終末產(chǎn)物及其受體結(jié)合及氧化應(yīng)激反應(yīng)在對(duì)高血壓腦組織的損害中所起的作用和機(jī)制。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取22周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)18只作為實(shí)驗(yàn)組，22周齡雄性Wistar大鼠6只作為正常對(duì)照組(NC組)，NC組每日用2mL蒸餾水灌胃。將SHR大鼠隨機(jī)分為3組，每組6只。高血壓對(duì)

7、照組(HC組)的6只大鼠每日用2mL蒸餾水灌胃，培哚普利治療組（P組）每日用2mg/kg培哚普利溶入2mL蒸餾水中灌胃，替米沙坦治療組（T組）每日用200mg/kg替米沙坦溶入2mL蒸餾水中灌胃。每?jī)芍軠y(cè)量各組血壓一次，喂養(yǎng)14周后測(cè)量:1、每組大鼠的體重、血壓;2、腦組織中SOD活性和NO的含量。3、CML、RAGE、NF-κB蛋白的表達(dá)。4、RAGE、NF-κB mRNA在腦組織的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、降壓藥物干預(yù)

8、14周后各組大鼠血壓和體重的變化
　　22周齡時(shí)，HC組、P組、T組血壓明顯高于NC組，藥物干預(yù)14周后，P組和T組血壓較HC組均顯著降低(P＜0.01)。而體重在用藥前后未見(jiàn)明顯變化(P＞0.05)。
　　2、各組大鼠海馬區(qū)HE染色結(jié)果
　　HE染色示:NC組大鼠海馬CAI區(qū)椎體細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，數(shù)量豐富，排列整齊，核仁明顯，核膜清晰。HC組則明顯排列紊亂、松散，有核固縮，數(shù)量減少。P組和T組則介于兩者之間。
　　

9、3、氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化
　　HC組較NC組SOD活性顯著下降（P＜0.05）、NO含量亦顯著下降(P＜0.05);P組和T組較HC組SOD活性和NO含量均顯著升高(P＜0.05)。
　　4、Western Blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　用藥14周后，各組大鼠各指標(biāo)表達(dá)結(jié)果:(1)NC組CML蛋白的表達(dá)為極少量，HC組表達(dá)較NC組顯著增加(P＜0.05)，P組較HC組明顯下調(diào)(P＜0.05)，T組較HC組也可見(jiàn)明顯下降(

10、P＜0.05)。(2)HC組RAGE蛋白和NF-κB蛋白的表達(dá)較NC組顯著增加(P＜0.05)，P組較HC組RAGE蛋白和NF-κB蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（P＜0.05），T組也較HC組RAGE蛋白和NF-κB蛋白顯著下調(diào)(P＜0.05)。
　　5、熒光實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　HC組較NC組NF-κB mRNA、RAGE mRNA表達(dá)明顯上調(diào)，而P組NF-κB mRNA、RAGE mRNA較HC組明顯下降(P＜0.05)，T組

11、NF-κB mRNA、RAGE mRNA也較HC組顯著下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、高血壓時(shí)腦組織氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，可能對(duì)腦組織造成損害。并且RAGE、NF-κB、NO、SOD等指標(biāo)表達(dá)上調(diào)。
　　2、培哚普利可能是通過(guò)增加ACE2的表達(dá)上調(diào)而降低氧化應(yīng)激從而減輕腦組織損害。替米沙坦可能是通過(guò)拮抗血管緊張素Ⅱ受體和抑制AGEs和RAGE而降低血壓減輕腦組織損害。
　　3、AGEs及其受體在細(xì)胞表面的