丹皮酚降低自發(fā)性高血壓大鼠血壓的血管相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、牡丹皮（Cortex Moutan, CM）在傳統(tǒng)中醫(yī)中常用來治療心腦血管疾病，是在亞洲和歐洲被廣泛應(yīng)用的一種傳統(tǒng)中草藥。丹皮酚（Paeonol, Pae）是牡丹皮的最主要有效成分之一，是一種小分子酚類化合物（2＇-羥基-4＇-甲氧基苯乙酮，C9H10O3），具有抗動脈粥樣硬化，抗心律失常，抗炎癥和抗氧化等多方面的藥理作用。CM是中醫(yī)治療高血壓的降壓組方中的主要藥物之一。近年來，關(guān)于CM降壓機(jī)制的研究已經(jīng)成為相關(guān)學(xué)科的研究熱點。但是，到

2、目前為止此類研究的結(jié)果均是在麻醉狀態(tài)下，一次或分次大量應(yīng)用Pae，觀察其對血壓正常動物動脈血壓的影響。Pae對高血壓模型動物清醒狀態(tài)下動脈血壓的影響及可能機(jī)制尚不明確。
　　一氧化氮（nitric oxide，NO）是心血管系統(tǒng)中最重要的生理調(diào)節(jié)因子之一，參與血管功能穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。機(jī)體有三種亞型的一氧化氮合酶，參與血管功能調(diào)節(jié)的主要是內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）。

3、研究證實eNOS的表達(dá)水平升高或被激活時，局部NO的產(chǎn)生量會增加，可以引起局部血管舒張、內(nèi)皮及平滑肌細(xì)胞功能變化等一系列血管機(jī)能改變。eNOS主要通過三條信號通路激活：即MEK/ERK、PI3K/Akt和cAMP/PKA途徑。Pae是否能夠通過影響內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的表達(dá)，誘導(dǎo)血管舒張，從而起到降壓作用，其可能激活機(jī)制如何尚不確定。
　　本研究旨在通過對經(jīng)典高血壓動物模型自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hyperten

4、sive rat, SHR）給予Pae處理，利用功能學(xué)和分子生物學(xué)等方法，從整體動物、離體組織及蛋白表達(dá)等不同水平，系統(tǒng)動態(tài)地觀察Pae處理對SHR大鼠動脈血壓的影響，并探討其對主動脈和腎動脈舒張功能的影響和可能作用機(jī)制。研究分為以下三部分：（1）丹皮酚對自發(fā)性高血壓大鼠動脈血壓的影響；（2）丹皮酚對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈舒張功能的影響；（3）丹皮酚對自發(fā)性高血壓大鼠腎動脈舒張功能的影響。
　　第一部分：丹皮酚對自發(fā)性高血壓大鼠

5、動脈血壓的影響
　　目的：觀察連續(xù)灌胃CM煎劑或Pae對SHR大鼠動脈血壓的影響。
　　方法：健康雄性WKY大鼠30只、SHR大鼠30只，分別隨機(jī)分為WKY+Control、WKY+CM、WKY+Pae、SHR+Control、SHR+CM和SHR+Pae組。采用灌胃的給藥方式，用無創(chuàng)鼠尾動脈血壓測量儀測量大鼠清醒狀態(tài)下的動脈血壓。
　　結(jié)果：
　　1.CM灌胃對WKY大鼠的平均動脈壓無影響，但在給藥后0.5h，

6、1h，2h，4h，8h均顯著降低了SHR大鼠的平均動脈血壓（P＜0.05）。
　　2.灌胃Pae對WKY大鼠的平均動脈壓無影響，但在給藥后0.5h，1h，2h，4h，8h均顯著降低了SHR大鼠的平均動脈血壓（P＜0.05）。
　　3.連續(xù)灌胃CM或Pae對WKY鼠的平均動脈壓無明顯影響。連續(xù)灌胃CM或Pae4天后，SHR大鼠的平均動脈壓降至正常水平；而且繼續(xù)應(yīng)用同等劑量的CM或Pae灌胃可將SHR大鼠的平均動脈血壓穩(wěn)定維持在

7、這一水平。
　　4.灌胃CM或Pae對WKY大鼠的收縮壓（systolic blood pressure，SBP）和舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）均沒有明顯影響，但可降低SHR大鼠的SBP及DBP（P＜0.05）。
　　小結(jié)：CM有顯著的降低SHR大鼠平均動脈壓的作用，并且其主要成分Pae，也能夠達(dá)到類似的降低SHR大鼠平均動脈壓的作用。
　　第二部分：丹皮酚對自發(fā)性高血壓大鼠主動脈

8、舒張功能的影響
　　目的：觀察Pae對大鼠離體主動脈環(huán)的舒張功能的影響，并分析其可能的作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用離體血管環(huán)灌流裝置以及BL-420E+生物機(jī)能實驗系統(tǒng)記錄大鼠離體主動脈環(huán)的舒縮活動。Western blot法測定eNOS的蛋白表達(dá)量， ELISA試劑盒檢測血管組織中NO與血管內(nèi)皮細(xì)胞cAMP的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.與WKY組相比，CM或Pae可以濃度依賴性的誘導(dǎo)SHR大鼠離體胸主動脈環(huán)舒

9、張（P＜0.05）。去內(nèi)皮或L-NAME預(yù)處理可以完全阻斷CM或Pae的效應(yīng)。
　　2.Pae顯著提高了SHR大鼠胸主動脈組織中eNOS的表達(dá)，并濃度依賴性地提高其NO水平（P＜0.05），但對WKY大鼠的胸主動脈組織中eNOS的表達(dá)及NO水平?jīng)]有顯著影響。
　　3.MEK阻斷劑PD98059及PI3K途徑阻斷劑LY294002預(yù)處理對Pae舒張SHR大鼠的主動脈及激活局部eNOS的作用沒有影響。
　　4.PKA的阻斷

10、劑H89預(yù)處理可阻斷Pae對SHR大鼠主動脈組織中eNOS的激活（P＜0.05）。
　　5.Pae預(yù)處理能濃度依賴性地提高培養(yǎng)的SHR大鼠胸主動脈內(nèi)皮細(xì)胞中cAMP的表達(dá)水平（P＜0.05）。
　　小結(jié)：Pae通過cAMP/PKA分子通路激活eNOS，提高局部組織中NO水平，誘導(dǎo)SHR大鼠胸主動脈舒張。
　　第三部分：丹皮酚對自發(fā)性高血壓大鼠腎動脈舒張功能的影響
　　目的：觀察Pae對腎動脈的舒張作用，并分析其可

11、能的作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用離體血管環(huán)灌流裝置以及BL-420E+生物機(jī)能實驗系統(tǒng)來記錄大鼠腎動脈的血管舒縮活動。內(nèi)皮型eNOS的蛋白表達(dá)量用Western blot測定，血管組織中NO與血管內(nèi)皮細(xì)胞cAMP的表達(dá)用ELISA試劑盒測定。
　　結(jié)果：
　　1.CM或Pae可以濃度依賴性的誘導(dǎo)SHR大鼠離體腎動脈環(huán)舒張（P＜0.05）。去內(nèi)皮或L-NAME預(yù)處理可以完全阻斷CM或Pae的效應(yīng)。
　　2.Pae顯著

12、提高了SHR大鼠腎動脈組織中eNOS的表達(dá)，并濃度依賴性地提高其NO水平（P＜0.05），但對WKY大鼠的腎動脈組織中eNOS的表達(dá)及NO水平?jīng)]有顯著影響。
　　3.MEK阻斷劑PD98059及PI3K途徑阻斷劑LY294002預(yù)處理對Pae舒張腎動脈及激活局部eNOS的作用沒有影響。
　　4.PKA的阻斷劑H89預(yù)處理可阻斷Pae對SHR大鼠腎動脈組織eNOS的激活（P＜0.05）。
　　5.Pae預(yù)處理能濃度依賴性