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1、第一部分頭頸部腫瘤放療患者傳統(tǒng)骨代謝生化指標(biāo)的檢測(cè)及意義 目的:通過檢測(cè)頭頸部腫瘤放療患者在接受不同劑量電離輻射時(shí)體液中的傳統(tǒng)骨代謝生化指標(biāo),以了解其在放療過程中的變化以及在監(jiān)測(cè)放射性頜骨損傷中的價(jià)值,探討電離輻射對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞介導(dǎo)的頜骨骨代謝的影響,為進(jìn)一步完善放射性頜骨損傷的病理機(jī)制提供理論依據(jù)。 對(duì)象和方法: 1.研究對(duì)象 中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院腫瘤放療科2008年7月至2009年1月期間的就診
2、患者中,選擇臨床確診為頭頸部腫瘤,并且符合本實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)的病例30例,其中男性19例,女性11例,年齡34~74歲,平均年齡53歲,疾病種類包括:鼻咽癌22例、舌癌3例;腮腺癌術(shù)后2例、上腭癌術(shù)后1例;木村病1例;非霍奇金淋巴瘤1例。這些患者適合并愿意接受國(guó)際抗癌聯(lián)盟(International UnionAgainst Cancer,UICC)指引的規(guī)范化頭頸部腫瘤放療方案。研究前所有患者均簽署知情同意書。 2.研究方法
3、 2.1病例入選標(biāo)準(zhǔn) 1)經(jīng)臨床確診的頭頸部腫瘤患者,影像學(xué)檢查腫瘤病變未侵犯骨組織,無(wú)骨轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,患者適合并愿意接受UICC指引規(guī)范化放療,頜骨在放射野內(nèi) 2)詳細(xì)詢問患者現(xiàn)病史、過去史、婚育史、家族史,排除患有糖尿病、甲甲狀腺和甲狀旁腺功能改變、肝腎功能不全、骨折、骨質(zhì)疏松、骨發(fā)育不良及各種遺傳性骨病等影響骨代謝的全身性疾病 3)患者在放療前半年內(nèi)未服用激素、降鈣素、鈣片、雙磷酸鹽、氟化物等影響骨代謝
4、的藥物 4)患者知情同意。 2.2標(biāo)本采集及處理 留取每個(gè)入組病例三個(gè)時(shí)段的血液和尿液標(biāo)本:即分別在患者接受放療前(0Gy)、接受電離輻射劑量30Gy后、接受電離輻射劑量50Gy后。按實(shí)驗(yàn)計(jì)劃如期抽取患者清晨(7:00 am)空腹靜脈血5 ml于不抗凝無(wú)菌試管中,室溫下靜置30 min,待血液凝固后,以3000r/ min的速度離心10 min,取上層血清當(dāng)即檢測(cè)血清堿性磷酸酶(alkaline phosphat
5、ase,ALP)、血鈣(calcium,Ca)、血磷(phosphate,P);同時(shí)留取患者晨尿10 ml,立即檢測(cè)尿鈣(urine cacalcium,UCa)和尿肌酐(urine creatinine,UCr)。 2.3標(biāo)本的檢測(cè) 血清ALP、Ca、P,尿Ca、Cr均使用日本日立7170S全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定,其中血ALP水平用AMP(α—aminc—αmethyl—l—propanol)緩沖液法測(cè)定;血P濃度用紫外
6、直接法測(cè)定;血Ca和尿Ca濃度用偶氮胂三法測(cè)定,尿Cr用苦味酸不除蛋白法測(cè)定,為了減少尿液濃度對(duì)尿鈣水平的影響,以尿Ca與尿Cr的比值(UCa/Cr)來表示尿鈣水平變化。 2.4統(tǒng)計(jì)處理 所有數(shù)據(jù)的運(yùn)算均在計(jì)算機(jī)SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件上進(jìn)行。血清ALP、Ca、P濃度的變化比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示;尿Ca/Cr水平變化用Mann—Whitney test檢測(cè),數(shù)據(jù)用中位數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(M±
7、SD)表示,兩種統(tǒng)計(jì)方法均以P值<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果: 1.反映骨形成的傳統(tǒng)骨代謝指標(biāo)變化 1)患者在接受0Gy.30Gy、50Gy3種不同劑量的電離輻射后血清ALP、Ca水平變化:血清ALP、Ca在放療前(0Gy)、接受輻射劑量30Gy、接受輻射劑量50Gy時(shí)其水平依次下降,表現(xiàn)出隨著電離輻射劑量增加而逐漸下降的趨勢(shì),但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無(wú)顯著性(P>0.05)。 2)患者在接受0Gy、30Gy
8、、50Gy3種不同劑量的電離輻射后血清P水平變化:在三種不同的輻射劑量下血P濃度基本穩(wěn)定,未見其由于電離輻射影響而產(chǎn)生變化的趨勢(shì),統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異亦無(wú)顯著性。(P>0.05) 2.反映骨吸收的傳統(tǒng)骨代謝生化指標(biāo)變化 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3種不同劑量電離輻射后U Ca/Cr水平變化:U Ca/Cr水平隨著接受電離輻射劑量增加而呈明顯下降趨勢(shì),與放療前(0Gy)比較,患者在接受接受輻射劑量30Gy及50Gy后,
9、U Ca/Cr水平差異均有顯著性。(0Gy vs30Gy P<0.05;0Gy vs50Gy P<0.05)。提示頭頸部腫瘤患者在接受30Gy的電離輻射后,其頜骨組織中的破骨細(xì)胞活性和破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收活動(dòng)開始受到抑制。 結(jié)論: 1.傳統(tǒng)骨形成生化指標(biāo)血ALP、Ca、P在監(jiān)測(cè)頜骨放射性骨代謝早期改變中不夠敏感。2.傳統(tǒng)骨吸收生化指標(biāo)U Ca/Cr可能是能夠監(jiān)測(cè)頜骨放射性骨代謝早期改變的敏感的生化指標(biāo)。 第二部分
10、頭頸部腫瘤放療患者新—代骨代謝生化指標(biāo)的檢測(cè)及意義 目的:通過檢測(cè)頭頸部腫瘤患者在接受不同劑量電離輻射時(shí)血液中的新一代骨代謝生化指標(biāo)血清骨堿性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BAP)、抗酒石酸酸性磷酸酶—5b(tartrate resistant acid phosphatase—5b,TRACP—5b),以了解血清BAP、TRACP—5b水平在放療過程中的變化,探討電離輻射對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞介導(dǎo)的
11、頜骨骨代謝的影響以及血清BAP、TRACP—5b在監(jiān)測(cè)放射性頜骨損傷中的價(jià)值,為進(jìn)一步完善放射性頜骨損傷的病理機(jī)制提供理論依據(jù)。 對(duì)象和方法: 1.研究對(duì)象:同第一部分 2.研究方法 2.1病例入選標(biāo)準(zhǔn):同第一部分 2.2標(biāo)本采集及處理: 留取每個(gè)入組病例三個(gè)時(shí)段的血液標(biāo)本:即在患者接受放療前(0Gy)、接受電離輻射劑量30Gy、接受電離輻射劑量50Gy。按實(shí)驗(yàn)計(jì)劃定期抽取患者晨起(7:0
12、0)空腹靜脈血5ml于不抗凝無(wú)菌試管中,室溫靜置30min,待血液凝固后,以3000r/min的速度離心10min,取上層血清,分裝在無(wú)菌Eppendof(EP)管中,并做好標(biāo)記,置于—70℃冰箱保存待測(cè)血清BAP、TRACP—5b。 2.3標(biāo)本的檢測(cè) 血清標(biāo)本收齊后,采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,EⅡSA)測(cè)定血清中BAP、TRACP—5b水平。嚴(yán)格按照試劑盒的
13、操作說明操作,在主波長(zhǎng)405nm,次波長(zhǎng)600nm的酶標(biāo)儀上測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和各標(biāo)本的吸光度值(optical density difference,OD405),將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)品的OD405值輸入計(jì)算機(jī)作回歸分析,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD405值為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出二者的相關(guān)方程,根據(jù)方程和質(zhì)控品及標(biāo)本的OD405值計(jì)算出各質(zhì)控液、標(biāo)本的濃度。 2.4統(tǒng)計(jì)處理 所有數(shù)據(jù)的運(yùn)算均在計(jì)算機(jī)上
14、應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0進(jìn)行。對(duì)非正態(tài)分布的原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布的資料,按正態(tài)分布作相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用配對(duì)t檢驗(yàn),P值<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果: 1.反映骨形成的新一代骨代謝生化指標(biāo)BAP水平變化: 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy3種不同劑量電離輻射后血清BAP水平變化:患者血清BAP水平隨著電離輻射劑量的增加而逐漸下降,在接受輻射劑量50Gy
15、后較放療前(0Gy)平均水平下降33.3%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示頭頸部腫瘤患者在接受50Gy劑量的電離輻射后,頜骨組織中的成骨細(xì)胞活性和成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成活動(dòng)明顯受到抑制,作為反映骨形成的指標(biāo),血清BAP與血清ALP、Ca在接受相同的電離輻射劑量下的變化趨勢(shì)是一致的,但是BAP的差異具有顯著性。 2.反映骨吸收的新一代骨代謝生化指標(biāo)TRACP—5b水平變化: 患者在接受0Gy、30Gy、50Gy
16、3種不同劑量電離輻射后血清TRACP—5b水平變化:患者血清TRACP—5b水平在3種輻射劑量下未見有明顯變化,差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P>0.05) 結(jié)論: 1.新一代骨形成生化指標(biāo)血清BAP可能是能夠監(jiān)測(cè)頜骨放射性骨代謝早期改變的有價(jià)值的敏感指標(biāo)。 2.新一代骨吸收生化指標(biāo)TRACP—5b可能在監(jiān)測(cè)頜骨放射性骨代謝早期改變中不敏感。 3.新一代骨形成生化指標(biāo)BAP較傳統(tǒng)指標(biāo)ALP在反映頜骨放射性骨代謝改
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