羧肽酶E基因多態(tài)性、胰島素原水平與冠狀動脈狹窄程度關(guān)系的流行病學(xué)研究.pdf

1、本研究以醫(yī)院為研究現(xiàn)場，采用國際上公認(rèn)的Gensini評分(Gensini’s score，GS)系統(tǒng)對冠狀動脈造影特征進(jìn)行系統(tǒng)的定量評價，并應(yīng)用大樣本的分子流行病學(xué)研究探討胰島素原水平及相關(guān)環(huán)境因素在冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用；探討胰島素原代謝過程中羧肽酶E基因多態(tài)性與胰島素原水平的關(guān)系，以及CPE基因多態(tài)性與高胰島素原水平的交互作用及其與冠狀動脈硬化程度的關(guān)系，對于進(jìn)一步闡明冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生的分子遺傳學(xué)機(jī)制及可能存在的CP

2、E基因.環(huán)境交互作用等具有重要的理論意義。 第一部分胰島素原水耳及相關(guān)環(huán)境因素與冠狀動脈狹窄程度關(guān)系的流行病學(xué)研究 目的：研究胰島素原水平及相關(guān)環(huán)境因素與冠狀動脈狹窄程度的關(guān)系。 方法：選擇行冠狀動脈造影檢查的1044例(男性777人，女性267人)疑診與確診冠心病患者作為研究對象；采用Gensini評分系統(tǒng)對冠狀動脈造影特征進(jìn)行系統(tǒng)的定量評價；采用協(xié)方差、偏相關(guān)、多元線性回歸、單因素和多因素有序分類變量Logi

3、stic回歸分析等方法評價胰島素原水平與冠狀動脈狹窄程度的相關(guān)性。 結(jié)論：高胰島素原水平可能與冠狀動脈狹窄程度增高有顯著關(guān)聯(lián)，確切的生物學(xué)機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究及不同種族人群的驗證。 第二部分冠狀動脈粥樣硬化癥人群中羧肽酶E基因突變的分子掃描與篩查研究 目的：初步探討引起高胰島素原血癥的CPE基因的突變及其與冠心病的關(guān)系。 方法：隨機(jī)選擇51例(男性34人，女性17人)疑診與確診冠心病患者作為研究對象，并

4、根據(jù)冠狀動脈造影檢查與調(diào)查問卷結(jié)果將研究對象分為冠心病組與對照組；采用聚合酶鏈反應(yīng).測序分型法與序列比對分析法對研究對象的CPE基因進(jìn)行全面掃描與鑒定，初步分析各SNPs位點的分布及其與冠心病等臨床特征的關(guān)系。 結(jié)果： 1.研究對象的-般情況與生化指標(biāo)的比較研究對象的收縮壓(P=0.015)、舒張壓(P=0.026)、高密度脂蛋白膽固醇(P=0.013)和胰島素水平(P=0.035)在冠心病病例組與對照組中的分布均有顯著

5、性差異。 2.CPE基因的測序及其比對分析GenBank數(shù)據(jù)庫公布的CPE基因(accession numbers.AB006890-AB006898)第2、4、7、9內(nèi)含子和第7外顯子中的某些序列與本研究結(jié)果可能存在不一致的地方。 3.CPE基因多態(tài)性住點的鑒定與分布情況通過對研究對象CPE基因8個外顯子及其外顯子-內(nèi)含子連接處區(qū)域的測序與鑒定分析，在其第3、4、5外顯子和相應(yīng)內(nèi)含子區(qū)域共發(fā)現(xiàn)了15個突變位點。其中，位

6、于非編碼區(qū)的T1951C、T1969A、T1951G、T1977C(第2內(nèi)含子區(qū))，T2681C(第3內(nèi)含子區(qū))以及T4367C、A4350T、A4309T、T4587A(笫7內(nèi)含子區(qū))共9個位點的突變頻率極低；A2925G(第4內(nèi)含子區(qū))、T3609C(第5內(nèi)含子區(qū))和A4545G(第7內(nèi)含子區(qū))位點的突變頻率均較高。另外，在編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)了三個點突變位點：第3外顯子區(qū)的G2294T、第4外顯子區(qū)的G2855A與第5外顯子區(qū)的C3164T

7、突變均為同義突變，不引起編碼氨基酸的改變，其中G2294T和G2855A位點先前沒有被報道過，G2294T位點的突變頻率很低。 4.CPE基因多態(tài)性與研究對象臨床特征的關(guān)系對5個突變頻率較高的位點的進(jìn)一步分析表明，這些多態(tài)性均不顯著影響血糖、胰島素與胰島素原的水平，但A4545G位點的變異型基因頻率在冠心病病例組與對照組中的分布有顯著性差異（X2=5.436,p=0.020). 結(jié)論:本研究人群中共發(fā)現(xiàn)5個突變頻率較高的

8、多態(tài)性位點，這些多態(tài)性位點可能均不影響胰島素原、胰島素及血糖水平，CPE基因多態(tài)性在冠心病發(fā)生發(fā)展中的作用需要大規(guī)模的流行病學(xué)和功能學(xué)研究進(jìn)一步驗證。 第三部分羧肽酶E第五外顯子區(qū)基因多態(tài)性與胰島素原水平、冠狀動脈狹窄程度關(guān)系的研究 目的：研究CPE第5外顯子區(qū)801C>T和847C>T’基因多態(tài)性與胰島素原水平及冠狀動脈狹窄程度的關(guān)系。 方法：選擇行冠狀動脈造影檢查的1044例(男性775人，女性267人)疑診

9、與確診冠心病患者作為研究對象；對研究對象進(jìn)行體格檢查以及胰島素原等血生化指標(biāo)的檢測；采用Gensini評分系統(tǒng)對冠狀動脈造影特征進(jìn)行系統(tǒng)的定量評價；采用聚合酶鏈反應(yīng).測序分型法檢測2個位點的基因型；采用單因素和多因素有序分類變量Logistic回歸模型計算各不同基因型人群其冠狀動脈狹窄程度增高的風(fēng)險(采用OR及其95％a表示)。(X2=5.436，P=0.020)。 結(jié)論：本研究人群中共發(fā)現(xiàn)5個突變頻率較高的多態(tài)性位點，這些多態(tài)

10、性位點可能均不影響胰島素原、胰島素及血糖水平，CPE基因多態(tài)性在冠心病發(fā)生發(fā)展中的作用需要大規(guī)模的流行病學(xué)和功能學(xué)研究進(jìn)一步驗證。 結(jié)果： 1.研究對象的一般情況，生化指標(biāo)及各位點等位基因在不同胰島素原水平組間的比較研究對象的BMI(P<0.001)、高密度脂蛋白膽固醇(P<0.001)、低密度脂蛋白膽固醇(P=0.050)、甘油三酯(P<0.001)、空腹血糖(P<0.001)、胰島素(P=0.005)、HOMA胰島素

11、抵抗指數(shù)(P<0.001)與Gensini評分(P<0.001)以及性別(P=0.050)、飲酒(P=0.009)構(gòu)成在不同胰島素原濃度組間(四分位間距分組)的分布均存在統(tǒng)計學(xué)差異。CPE exon5 801C>T等位基因頻率在各組中的分布無顯著性差異(P=0.760)，CPE exon5 847C>T位點沒有發(fā)現(xiàn)變異基因型。 2.胰島素原水平等相關(guān)指標(biāo)在CPE exon5 801C>T不同基因型組中的比較以年齡、性別與BMI為

12、協(xié)變量的協(xié)方差分析結(jié)果顯示，空腹血糖(P=0.157)、胰島素(P=0.539)、HOMA胰島素抵抗指數(shù)(P=0.608)與胰島素原水平(P=0.975)在CPE exon5 801C>T不同基因型組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.CPE exon5 801C>T基因多態(tài)性與胰島素原關(guān)系的Logistic回歸分析CPE exon5 801C>T的三種基因型頻率在不同胰島素原水平組間(四分位間距分組)的分布不存在顯著性差異(X2=2

13、.877，P=0.824)。以胰島素原水平(四分位間距)分組變量為有序分類應(yīng)變量的單因素Ordinal Logistic回歸分析與調(diào)整了年齡、性別、BMI、血糖及吸煙等因素的多因素Logistic回歸分析結(jié)果均顯示，CPE exon5 801C>T位點的基因多態(tài)性與胰島素原水平可能不存在關(guān)聯(lián)。 4.CPE exon5 801C>T各基因型與冠狀動脈狹窄程度關(guān)系的Logistic回歸分析CPE exon5 801C>T的三種基因型

14、頻率在不同Gensini評分組間(四分位間距分組)的分布存在顯著性差異(X2=13.745，P=0.033)；CPE exon5 847C>T位點沒有發(fā)現(xiàn)變異基因型。以Gemini評分(四分位間距)分組變量作為有序分類應(yīng)變量的多因素Ordinal Logistic回歸分析結(jié)果表明，調(diào)整了年齡、性別、BMI、血糖及吸煙等因素后，攜帶801TT的個體與攜帶801CC者比較，其冠狀動脈狹窄程度增高的風(fēng)險增加了2.13倍(校正OR=3.13，9

15、5％CI=1.18-8.28)；將兩個變異的基因型聯(lián)合分析表明，攜帶801CT+TT的個體其冠狀動脈狹窄程度增高的風(fēng)險則增加了30％(校正OR=1.30，95％CI=0.99-1.70)，亦接近統(tǒng)計學(xué)顯著性水平。 5.CPE exon5 801C>T基因多態(tài)性與冠狀動脈狹窄程度關(guān)系的分層分析攜帶CPE exon5 801C>T變異基因型的個體與攜帶CPE exon5801CC基因型者相比，其冠狀動脈狹窄程度增高的風(fēng)險在年齡>60

16、歲的個體(801TT基因型的校正OR=3.86，95％CI=1.07-13.90)、男性個體(801TT基因型的校正OR=3.43，95％CI=1.20-9.87；801CT+TT基因型的校正OR=1.37，95％CI=1.00-1.87)以及吸煙個體(801CT基因型的校正OR=1.69，95％CI=1.12-2.56；801TT基因型的校正OR=5.73，95％CI=1.56-21.12；801CT+TT基因型的校正OR=1.85，