雙功能融合蛋白ATF-EGF-Fc抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase typeplasminogen activator，uPA)在惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移及血管生長中發(fā)揮重要作用，尿型纖溶酶原激活劑受體(uPAR)和表皮生長因子受體(EGFR)在惡性腫瘤細(xì)胞中普遍表達(dá)，與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖和浸潤密切相關(guān)。因此，uPA/uPAR及EGFR已經(jīng)成為惡性腫瘤治療的新靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了由表皮生長因子(EGF)、uPA活性結(jié)構(gòu)域氨基酸末端片段(Amino-Termi

2、nal Fragment，ATF)和IgG恒定區(qū)Fc段串聯(lián)而成的雙功能融合蛋白(ATF-EGF-Fc)，并評(píng)價(jià)了其在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中抑制腫瘤活性的作用。 方法： 1.觀察ATF-EGF-Fc融合蛋白對(duì)HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)增殖的影響作用。 2.觀察ATF-EGF-Fc融合蛋白對(duì)HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)遷徙的影響作用。 3.觀察ATF-EGF-Fc融合蛋白對(duì)腫瘤擦傷試驗(yàn)的影響。 4 觀察A

3、TF-EGF-Fc融合蛋白對(duì)雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管形成的影響。 5 檢測ATF-EGF-Fc融合蛋白對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。 6 在裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)中觀察ATF-EGF-Fc融合蛋白在體內(nèi)抑制腫瘤的療效。 結(jié)果： 1.MTT比色法結(jié)果顯示，在100-400nM濃度范圍內(nèi)，HUVEC細(xì)胞增殖抑制率隨著ATF-EGF-Fc融合蛋白濃度的增加而上升，ATF-EGF-Fc能明顯抑制HUVEC細(xì)胞的增值，

4、并且呈劑量依賴關(guān)系。 2.與對(duì)照組相比，ATF-EGF-Fc、ATF-Fc能抑制uPA誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞遷移。 3.與對(duì)照組相比，細(xì)胞培養(yǎng)基中加入ATF-EGF-Fc融合蛋白48小時(shí)后腫瘤細(xì)胞的增殖明顯受到抑制，擦痕兩側(cè)細(xì)胞密度相對(duì)較低。 4 對(duì)比對(duì)照組，加入ATF-EGF-Fc能顯著抑制雞胚絨毛膜血管的生成，其抑制血管生成作用效果優(yōu)于ATF-Fc和Herceptin組。 5 結(jié)晶紫染色法觀察ATF-E

5、GF-Fc融合蛋白對(duì)MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，比較對(duì)照組，ATF-EGF-Fc具有明顯的抑制MCF-7細(xì)胞作用，與藥物濃度增加成正相關(guān)。 6 在裸鼠肝癌模型實(shí)驗(yàn)中，ATF-EGF-Fc處理組中瘤塊重量最輕，其次為ATF-Fc組。ATF-EGF-Fc給藥組抑瘤率達(dá)到了74.7％，與對(duì)照組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)有差異。 結(jié)論： 1.ATF-EGF-Fc融合蛋白可顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)及肝癌細(xì)胞(HepG2)的增殖