油菜花葉病毒(ORMV)126kDa復(fù)制酶基因在擬南芥中的可誘導(dǎo)表達(dá).pdf

1、分類(lèi)號(hào)Q78單位代碼10447密級(jí)無(wú)學(xué)號(hào)1410150401碩士學(xué)位論文油菜花葉病毒（油菜花葉病毒（MVMV）126kDa126kDa復(fù)制酶基因在擬南芥中的復(fù)制酶基因在擬南芥中的可誘導(dǎo)表達(dá)可誘導(dǎo)表達(dá)InducibleExpressionofMV126kDaReplicaseGeneinArabidopsisthaliana作者姓名黃學(xué)娟黃學(xué)娟專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)微生微生物學(xué)物學(xué)指導(dǎo)教師姓名胡全安胡全安曹雪松曹雪松學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院論文提交

2、日期20172017年0303月聊城大學(xué)碩士學(xué)位論文i摘要植物病毒危害農(nóng)作物的形勢(shì)十分嚴(yán)重，是導(dǎo)致植物病害的主要原因之一。植物病毒對(duì)農(nóng)作物的危害不僅嚴(yán)重威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)結(jié)構(gòu)，對(duì)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)也造成了嚴(yán)重?fù)p失。因此，如何防治植物病毒病害早已是科學(xué)家們所需要研究和解決的重要課題。隨著研究發(fā)現(xiàn)，植物本身具有能夠抵抗植物病毒的防御機(jī)制，即RNA干擾機(jī)制。RNA干擾是由雙鏈RNA分子介導(dǎo)的、序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象。植物體內(nèi)的小RNA在植物對(duì)抗病毒的R

3、NA干擾機(jī)制中起著核心作用，它來(lái)自于非蛋白編碼RNA的前體。小RNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與靶mRNA結(jié)合起負(fù)調(diào)控的作用，利用sRNA抗植物病毒是近年來(lái)所研究的一種有效手段。但是病毒為了有效侵染植物，就必須抑制植物體內(nèi)RNAi機(jī)制。因此，植物病毒同時(shí)也能夠編碼蛋白在RNAi的不同步驟起到抑制作用，這類(lèi)蛋白被稱(chēng)為基因沉默抑制因子。油菜花葉病毒MV作為危害油菜等作物生產(chǎn)的病毒之一，屬于煙草花葉病毒屬。MV基因結(jié)構(gòu)中的復(fù)制酶基因表達(dá)的126kD

4、a蛋白是一種基因沉默抑制因子。126kDa復(fù)制酶蛋白在體外（invitro）可結(jié)合21nt左右的小RNA，油菜花葉病毒的侵染不僅能引起21nt小RNA的積累，還對(duì)該類(lèi)小RNA的底物mRNA的表達(dá)產(chǎn)生了影響。為了進(jìn)一步驗(yàn)證復(fù)制酶蛋白在體內(nèi)（invivo）對(duì)21nt小RNA的結(jié)合富集作用，同時(shí)為了更好地了解復(fù)制酶蛋白對(duì)植物內(nèi)源轉(zhuǎn)錄本的影響，以及其如何通過(guò)影響小RNA進(jìn)而影響小RNA底物mRNA的表達(dá)，我們嘗試在植物中過(guò)量表達(dá)該蛋白。但是前期

5、的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有獲得持續(xù)過(guò)量地表達(dá)該蛋白的植物，這可能是因?yàn)檫^(guò)量表達(dá)該蛋白對(duì)植物有害。本研究利用植物的可誘導(dǎo)表達(dá)技術(shù)，在擬南芥中有條件地表達(dá)126kDa復(fù)制酶蛋白，進(jìn)而研究MV126kDa復(fù)制酶蛋白對(duì)植物內(nèi)源小RNA代謝與功能的影響。這些內(nèi)源小RNA與植物對(duì)病毒侵染的應(yīng)答有著緊密聯(lián)系，所以研究這些富集的小RNA類(lèi)別及作用機(jī)制也有助于抗病育種的進(jìn)一步發(fā)展。SilwetL77是一種非離子型的表面活性劑，常用于植物的轉(zhuǎn)化。本研究發(fā)現(xiàn)，SilwetL