天然藥物A對(duì)單眼形覺剝奪大鼠視皮質(zhì)突觸傳遞效能影響及相關(guān)分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究旨在從突觸水平探討年齡和單眼形覺剝奪(MD)效應(yīng)對(duì)視皮質(zhì)突觸傳遞長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)的影響，以及研究天然藥物A對(duì)MD成年大鼠視皮質(zhì)突觸傳遞效能影響及其相關(guān)分子機(jī)制，以期對(duì)弱視治療提供參考。 方法：第一部分：健康Wistar大鼠48只分2組進(jìn)行不同目的研究：①健康Wistar大鼠24只分為4組，每組6只，除正常外其余各組均于生后14天制作右眼MD模型，分組情況：正常P45天組、正常P90天組、MDP45天組、MDP90

2、天組。采用細(xì)胞外記錄技術(shù)觀察各組視皮質(zhì)II/III層突觸傳遞長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)誘發(fā)率，以及各組在高頻刺激(HFS)刺激后，興奮性突觸后電位(EPSP)以及群峰電位(PS)的變化。②健康Wistar大鼠24只分成4組，每組6只，除正常外其余各組均于生后14天制作右眼MD模型，分組情況：正常P90天組，MDP90天高劑量給藥組，MDP90天低劑量給藥組，MDP90天對(duì)照組。正常組和MDP90天對(duì)照組分別側(cè)腦室予人工腦脊液(ACSF)注入，

3、高、低劑量組側(cè)腦室分別給予100nmol·L-1，10nmol·L-1天然藥物A，采用細(xì)胞外記錄技術(shù)觀察各組注藥后10，30，60，90min對(duì)基礎(chǔ)突觸傳遞水平的影響。給藥90分鐘后，給予各組視皮質(zhì)IV層高頻刺激，觀察藥物對(duì)視皮質(zhì)II/III層LTP誘導(dǎo)的影響。第二部分：健康Wistar大鼠24只分成4組，每組6只，除正常外其余各組均于生后14天制作右眼MD模型，分組情況：正常P90天組，MDP90天高劑量給藥組，MDP90天低劑量給藥

4、組，MDP90天對(duì)照組。高、低劑量給藥組于生后P90天側(cè)腦室各予100，10nmol·L-1天然藥物A注入，飼養(yǎng)一周后，深度麻醉后處死。采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)觀察各組nNOSmRNA的表達(dá)。第三部分：分組情況和給藥方式同上，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察各組NMDAR1受體的表達(dá)。 結(jié)果：1.年齡和異常視覺經(jīng)驗(yàn)(MD)對(duì)視皮質(zhì)突觸傳遞效能的影響：第一部分：①各組視皮質(zhì)II/III層LTP誘發(fā)率正常P45天組最高(5/6)，最低的為MDP

5、90天組。②高頻刺激后EPSP斜率和PS幅值不同時(shí)段與基礎(chǔ)突觸傳遞水平的比較：EPSP斜率和PS幅值在正常P45天組、正常P90天組HFS后0，30，60min提高顯著(P<0.01)。同一時(shí)間點(diǎn)比較，HFS后30，60min各組EPSP斜率以及PS幅值與基礎(chǔ)值之比，組間比較差異具有顯著性(P<0.01)。2.天然藥物A對(duì)MD成年大鼠視皮質(zhì)突觸傳遞效能的影響： 第一部分：①不同濃度天然藥物A對(duì)基礎(chǔ)突觸傳遞水平的影響：在MD對(duì)照組

6、和正常組側(cè)腦室給予ACSF后10，30，60，90minEPSP斜率和PS幅值并無(wú)明顯變化，天然藥物A10nmol·L-1，100nmol·L-1隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)能提高EPSP斜率和PS幅值，高劑量組更具有顯著性。②天然藥物A10，100nmol·L-1對(duì)高頻刺激誘導(dǎo)的11/111層LTP的影響：HFS后30，60min后，EPSP斜率和PS幅值MD高、低荊量給藥組、正常組均高于MD對(duì)照組(P<0.01)。3.天然藥物A對(duì)MD成年大鼠視皮

7、質(zhì)nNOSmRNA表達(dá)的影響。第二部分：MD組視皮質(zhì)nNOSmRNA表達(dá)量與正常組相比明顯下降(P<0.01)。天然藥物A高劑量組能上調(diào)視皮質(zhì)nNOSmRNA表達(dá)(P<0.05)。4.天然藥物A對(duì)MD成年大鼠視皮質(zhì)NMDAR1受體表達(dá)的影響。第三部分：MD組視皮質(zhì)NMDAR1受體表達(dá)量與正常組相比明顯下降(P<0.01)。天然藥物A高劑量組能上調(diào)視皮質(zhì)NMDAR1受體表達(dá)(P<0.05)。 結(jié)論：1.大鼠視皮質(zhì)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP

8、)誘發(fā)呈視覺經(jīng)驗(yàn)依賴性，MD可降低剝奪眼對(duì)側(cè)視皮質(zhì)LTP誘發(fā)率；視皮質(zhì)興奮性突觸后電位(EPSP)斜率、群峰電位(PS)幅值對(duì)高頻刺激的反應(yīng)受年齡和異常視覺經(jīng)驗(yàn)影響，年齡越大，以及視覺經(jīng)驗(yàn)的異常(單眼形覺剝奪)會(huì)降低視皮質(zhì)對(duì)高頻刺激的反應(yīng)。2。天然藥物A側(cè)腦室注藥能提高M(jìn)D成年大鼠視皮質(zhì)II/III層基礎(chǔ)突觸傳遞水平，增強(qiáng)EPSP以及PS幅值，呈劑量依賴性加強(qiáng)HFS對(duì)視皮質(zhì)II/IIILTP的誘導(dǎo)，提高突觸傳遞效能。3。天然藥物A側(cè)腦室