NSCLC表達(dá)FasL對(duì)TIL的影響及患者血清中可溶性Fas、FasL的檢測(cè).pdf

1、Fas又稱APO-Ⅰ,現(xiàn)命名為CD95分子,是一種能夠傳遞死亡信號(hào)的細(xì)胞表面分子,屬于腫瘤壞死因子受體家族成員,是一種Ⅰ型細(xì)胞膜蛋白,其天然配體為FasL,屬于腫瘤壞因子家族成員,是一種Ⅱ型跨膜蛋白,通常表達(dá)于T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及角膜等少數(shù)免疫特赦部位,當(dāng)Fas與FasL結(jié)合就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡.在腫瘤免疫中人們過去認(rèn)為Fas-FasL途徑是CTL殺傷腫瘤的作用機(jī)制之一,但最近研究發(fā)現(xiàn)一些腫瘤細(xì)胞如肝癌、結(jié)腸癌細(xì)胞也表達(dá)FasL,但并不介導(dǎo)腫

2、瘤細(xì)胞自身凋亡卻能借助FasL-Fas途徑反殺傷活化的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL),這也是腫瘤免疫逃避的新機(jī)制.反殺傷機(jī)理的研究可望開辟腫瘤免疫治療的新途徑.長(zhǎng)期以來腫瘤免疫治療研究的著眼點(diǎn)多集中在如何激活淋巴細(xì)胞特別是T細(xì)胞,但激活的T細(xì)胞膜表面Fas表達(dá)上調(diào),較靜止T細(xì)胞更易受致腫瘤細(xì)胞的反殺傷.因此我們認(rèn)為不克服腫瘤細(xì)胞的免疫反殺傷,免疫治療就會(huì)失敗.由于FasL抗體能競(jìng)爭(zhēng)性地與FasL結(jié)合從而有效阻斷FasL-Fas途徑傳遞死亡信

3、號(hào).因此,FasL抗體具有保護(hù)T細(xì)胞免受腫瘤細(xì)胞的免疫反殺傷作用.這一研究潛在的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益頗大.根據(jù)上述理論,國(guó)外有學(xué)者進(jìn)行過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)并觀察到反殺傷作用的存在.而臨床研究國(guó)內(nèi)外均未見報(bào)道.因此,我們用病人手術(shù)切除之新鮮腫瘤組織作為標(biāo)本分離制備淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞并分別作靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞,觀察腫瘤細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞的反殺傷作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果更貼近臨床.基于上述認(rèn)識(shí),該課題從以下幾個(gè)方面展開了研究:①分析非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中肺腺癌及腺

4、癌細(xì)胞株A<,549> FasL的表達(dá)情況及其臨床意義;②檢測(cè)肺腺癌細(xì)胞及腺癌細(xì)胞株A<,549>對(duì)TIL的殺傷活性及FasL抗體對(duì)TIL的保護(hù)作用;③檢測(cè)肺癌患者外周血中sFas及sFasL的表達(dá)情況及臨床意義.通過以上研究,我們發(fā)現(xiàn):1.肺腺癌及腺癌細(xì)胞株A<,549> FasL的表達(dá).8例肺腺癌患者中,FasL表達(dá)陽陽性率為80.2﹪,而腺癌細(xì)胞株A<,549>的陽性表達(dá)率也達(dá)到了68.4﹪.提示肺腺癌細(xì)胞及A<,549>細(xì)胞具有

5、反殺傷免疫細(xì)胞的能力.并推測(cè)有可能是肺腺癌易發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要原因之一.2.肺腺癌細(xì)胞及A<,549>對(duì)TIL的殺傷作用及FasL抗體對(duì)TIL的保護(hù)作用.肺腺癌細(xì)胞及A<,549>培養(yǎng)1~2周后,用MTT法測(cè)定其對(duì)TIL的殺傷活性.8例經(jīng)IL-2培養(yǎng)的肺腺癌細(xì)胞及A<,549>均對(duì)肺癌組織分離培養(yǎng)的TIL細(xì)胞有不同程度的殺傷作用.但經(jīng)FasL抗體封閉后的腫瘤細(xì)胞對(duì)TIL的殺傷作用均有所下降,兩組之間存在顯著差異(p<0.05).3.肺癌患者

6、外周血sFas及sFasL的表達(dá).18例肺癌患者(其中鱗癌8例,小細(xì)胞癌1例,低分化癌2例,腺癌7例),sFas及sFasL的水平顯著高于正常人(8例健康志愿者).提示:可溶性Fas與膜Fas競(jìng)爭(zhēng)性地與FasL結(jié)合,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡.可溶性FasL可能通過轉(zhuǎn)式機(jī)制導(dǎo)致別的表達(dá)Fas的免疫細(xì)胞發(fā)生凋亡.從而使腫瘤細(xì)胞躲避免疫攻擊.通過該研究,我們得出如下結(jié)論:1)肺腺癌細(xì)胞及A549細(xì)胞高度表達(dá)FasL;2)肺腺癌細(xì)胞及A<,549>細(xì)胞