化瘀消瘤方含藥血清對人肺癌A549細(xì)胞Fas-Fasl表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用血清藥理學(xué)的方法，通過觀察化瘀消瘤方含藥血清對人肺癌A549細(xì)胞Fas和FasL表達(dá)的影響，探討化瘀消瘤方含藥血清對人肺癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及其機(jī)制，為臨床應(yīng)用化瘀消瘤方治療肺癌提供理論依據(jù)。 方法： (1)健康家兔20只，雄性，隨機(jī)分5組，每組4只。用不同劑量的化瘀消瘤方水煎劑給家兔灌胃，通過頸動脈采血，分離血清，制備高、中、低劑量化瘀消瘤方含藥血清及全反式維甲酸血清和生理鹽水對照血清。 (2)

2、以高、中、低劑量化瘀消瘤方含藥血清，全反式維甲酸血清和對照血清分別作用于人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞。 (3)上述各組合藥血清分別作用24h、48h后，應(yīng)用倒置相差顯微鏡分別對細(xì)胞生長和凋亡進(jìn)行動態(tài)形態(tài)學(xué)觀察；HE染色光鏡觀察用藥前后A549細(xì)胞形態(tài)變化；免疫組化SP法檢測A549細(xì)胞Fas和FasL的表達(dá)。 結(jié)果： (1)倒置顯微鏡觀察，A549細(xì)胞排布緊密，貼壁生長，細(xì)胞為多邊形，細(xì)胞透亮、飽滿；細(xì)胞密集，相鄰

3、細(xì)胞有細(xì)胞重疊現(xiàn)象；經(jīng)低劑量化瘀消瘤方含藥血清作用后，A549細(xì)胞數(shù)目減少，但形態(tài)學(xué)改變不明顯。經(jīng)中、高劑量化瘀消瘤方含藥血清及RA組處理24h后，則出現(xiàn)一定程度的形態(tài)學(xué)改變，表現(xiàn)為細(xì)胞稀疏，胞突回縮，細(xì)胞體積變小、變圓形；重疊生長現(xiàn)象減少，細(xì)胞數(shù)目減少；胞漿透亮度下降，顆粒感增強(qiáng)；部分細(xì)胞脫落呈懸浮狀，并見細(xì)胞碎片，上述變化在48h后更明顯。 (2)HE染色光鏡觀察，可見經(jīng)含化瘀消瘤方的兔血清作用后，A549細(xì)胞體積變小、變圓

4、形，細(xì)胞稀疏，細(xì)胞間隙增大；胞膜皺縮，細(xì)胞核大小不等，形態(tài)不規(guī)則，胞核內(nèi)染色質(zhì)密度增高，呈半月形或環(huán)形凝集在核膜周邊，顯示典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)，其中以高劑量含藥血清組最多。不含藥血清組細(xì)胞核完整，未見凋亡形態(tài)細(xì)胞。 (3)免疫組織化學(xué)染色顯示，化瘀消瘤方含藥血清可上調(diào)A549細(xì)胞Fas的表達(dá)(P<0.05)，下調(diào)A549細(xì)胞FasL的表達(dá)(P<0.05)?；鱿龇胶幯遄饔?4h、48h后，高劑量化瘀消瘤方含藥血清組和ATRA

5、組與對照血清組之間Fas的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且Fas的表達(dá)均隨含藥血清劑量的增加和作用時(shí)間的延長而增強(qiáng)?；鱿龇胶幯遄饔?4h、48h后，中、高劑量化瘀消瘤方含藥血清和ATRA組與對照血清組之間FasL的表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且FasL的表達(dá)均隨含藥血清劑量的增加和作用時(shí)間的延長而減弱。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)表明化瘀消瘤方含藥血清可以上調(diào)肺癌A549細(xì)胞Fas的表達(dá)和下調(diào)其FasL的表達(dá)，