PPARγ和PCNA在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:口腔鱗癌是常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤之一,近年來(lái)其發(fā)病率日漸增高,嚴(yán)重威脅人類的健康和生命。目前口腔鱗癌的在早期診斷、早期治療和遠(yuǎn)期療效上仍不夠理想,故口腔鱗癌患者的早期診斷、惡性程度分析以及預(yù)后判斷已成為當(dāng)今口腔鱗癌研究的熱點(diǎn)。過(guò)氧化物酶體增長(zhǎng)因子活化受體(Peroxisome proliferator activated receptor,PPAR)因其可以被過(guò)氧化物酶體增殖劑激活而得名,在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與糖代謝、脂肪細(xì)胞分化和能量平

2、衡方面起重要的作用。PPAR分為PPARα、PPARδ、PPARγ三種亞型,已有一些研究證實(shí)PPARγ在許多人癌細(xì)胞系中高表達(dá),如脂肪肉瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌和胃癌等,但在人類癌細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)與癌細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)系及其相互作用機(jī)理尚未完全研究清楚。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),又稱周期蛋白,是由Miyachi等于1978年從系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血清中發(fā)現(xiàn)的,它與細(xì)胞的增殖周期密切相關(guān),許多實(shí)驗(yàn)證明它在核內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)

3、的高低與細(xì)胞增殖活性密切相關(guān),它已成為一個(gè)成熟的反映細(xì)胞增殖活性和分化水平的指標(biāo)之一,近年來(lái)已發(fā)展為原位檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的新型探針。本實(shí)驗(yàn)的目的是探討PPAR和PCNA蛋白在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義。
　　 方法:
　　 2009年10月-2010年06月手術(shù)切除的50例口腔鱗狀細(xì)胞癌、50例癌旁粘膜(距瘤緣2cm)和50例切緣正常粘膜(距瘤緣≥5cm)標(biāo)本。所有患者術(shù)前未經(jīng)過(guò)任何治療。標(biāo)本均為術(shù)后立即取材,分二份

4、,一份固定于4％甲醛中,石蠟包埋;另一份固定于70％乙醇中,4℃保存。
　　 1：免疫組織化學(xué)測(cè)定PPARγ和PCNA在口腔鱗癌組織、癌旁組織及正?？谇徽衬そM織中的表達(dá)
　　 取各組蠟塊,常規(guī)石蠟切片,脫蠟至水,按照S-P試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行操作,通過(guò)鏡下觀察,比較各組間PPARγ和PCNA蛋白表達(dá)的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2：流式細(xì)胞術(shù)行PPARγ和PCNA在口腔鱗癌組織、癌旁組織及正?？谇徽衬そM織中的蛋白

5、定量分析
　　 取70％乙醇固定的組織,將其制成單細(xì)胞懸液,500目尼龍網(wǎng)過(guò)濾,離心,1000rpm,5分鐘;加入一抗工作液,室溫下靜置40分鐘;加入二抗工作液,室溫下靜置1小時(shí);機(jī)檢,讀取結(jié)果。
　　 3：結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)；
　　 3.1：免疫組織化學(xué)PPARγ/染色陽(yáng)性為胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒,PCNA為深黃褐色核表達(dá)。以免疫組化半定量法評(píng)價(jià)其表達(dá)。
　　 3.2：蛋白表達(dá)定量分析以實(shí)驗(yàn)樣品蛋白表達(dá)的平均熒光

6、強(qiáng)度(均道值)表示蛋白的含量。
　　 4：統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析,采用t檢驗(yàn)、X2檢驗(yàn)和Spearman等方法進(jìn)行相關(guān)檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1：PPARγ和PCNA在口腔鱗癌組織、癌旁組織及正常口腔粘膜組織中的表達(dá)PPARγ在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為60.0％(30/50),高于癌旁組織(26.0％,13/50)和正常粘膜組織(2.

7、0％,1/50)(P＜0.05);PCNA在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為72.0％(36/50),高于癌旁組織(26.0％,13/50)和正常粘膜組織(4.0％,2/50)(P＜0.05)。
　　 2：PPARγ和PCNA在口腔鱗癌中流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果PPARγ在口腔癌組織、癌旁組織和正常粘膜組織的均道值分別為396.56±33.39、333.36±15.93和289.28±13.80,口腔鱗癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織及正常粘膜組織,

8、三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。PCNA在鱗癌組織、癌旁組織和正常粘膜組織的均道值分別為543.11±41.55、456.97±23.86和409.40±40.07,三組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,PPARγ和PCNA在口腔正常粘膜組織、癌旁組織及鱗癌組織中的表達(dá)存在顯著差異,呈遞增趨勢(shì),與免疫組化結(jié)果相符合。
　　 3：口腔鱗癌組織中PPARγ和PCNA的表達(dá)與病理及臨床特征的關(guān)系通過(guò)相

9、關(guān)性分析,免疫組化結(jié)果顯示PPARγ和PCNA的表達(dá)與細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P＜0.05)。PPARγ和PCNA蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡均無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　 4：口腔鱗癌組織中PPARγ和PCNA表達(dá)的相關(guān)性免疫組化結(jié)果顯示,PPARγ和PCNA的表達(dá)成正相關(guān)。流式免疫熒光檢測(cè)蛋白的均道值與組化蛋白表達(dá)結(jié)果相一致,PPARγ和PCNA的蛋白均道值成正相關(guān)(r=0.482,P=0.032)。