睪酮對動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：
　　 動(dòng)脈粥樣硬化(arthcrosclcrosis,AS)性心血管疾病被稱為發(fā)達(dá)國家的“頭號(hào)殺手”,在發(fā)展中國家發(fā)病率也越來越高。世界衛(wèi)生組織預(yù)測,在世界范圍內(nèi)的傳染性疾病病死率得到有效控制之后,到2020年心血管疾病將成為世界第一死因。急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)包括不穩(wěn)定型心絞痛,急性非ST段抬高型心肌梗死和急性ST段抬高型心肌梗死,它的病理生理基礎(chǔ)為動(dòng)脈粥樣硬化易損

2、斑塊的破裂及繼發(fā)的血栓形成。ACS是嚴(yán)重危害人類健康的一大類疾病,致死、致殘率高,對該病的預(yù)防診治研究一直是各國政府的投入重點(diǎn)。目前存在的主要問題是識(shí)別易損斑塊并及早臨床干預(yù),增強(qiáng)斑塊的穩(wěn)定性。
　　 流行病學(xué)調(diào)查證實(shí),男性性別是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素之一。早些時(shí)候,人們注意到運(yùn)動(dòng)員濫用雄激素可出現(xiàn)嚴(yán)重血栓形成甚至猝死,認(rèn)為雄激素不利于心血管系統(tǒng)的保護(hù)。近年的研究顯示,老年男性冠心病患者血中的雄激素水平顯著低于無冠心病者,雄激素

3、水平與男性冠狀動(dòng)脈狹窄的嚴(yán)重程度和心肌梗死發(fā)生率負(fù)相關(guān),合適劑量的雄激素可以改善血脂代謝紊亂和凝血纖溶異常狀況、抑制血管內(nèi)膜斑塊形成等。因此認(rèn)為,雄激素缺乏同樣不利于心血管系統(tǒng)的健康。到目前為止,有關(guān)雄激素減低與AS發(fā)病之間關(guān)系的研究結(jié)果仍存在著爭議,雄激素在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性中的作用尚不清楚,相關(guān)機(jī)制尚未完全闡明。本課題的研究目的是探討雄激素在AS發(fā)生發(fā)展、斑塊穩(wěn)定性中的作用與其相關(guān)機(jī)制,進(jìn)而為低雄激素血癥老年男性進(jìn)行動(dòng)脈粥樣硬化

4、、ACS預(yù)防與臨床干預(yù)提供依據(jù)。
　　 目的：
　　 通過高脂飼料喂養(yǎng)新西蘭兔,結(jié)合頸動(dòng)脈球囊損傷內(nèi)皮細(xì)胞建立動(dòng)脈粥樣硬化兔模型,然后液氮激發(fā)斑塊破裂去創(chuàng)建一種操作簡單、價(jià)格低廉、耗時(shí)短、可重復(fù)性好、動(dòng)物死亡率低、成模滿意的與人類斑塊相似的動(dòng)脈粥樣硬化破裂斑塊模型,為急性冠脈綜合征的基礎(chǔ)研究及臨床干預(yù)治療研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法
　　 1、實(shí)驗(yàn)采用雄性新西蘭純種大白兔30只,隨機(jī)分為2個(gè)組,分別給予改良

5、的球囊損傷頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞術(shù)加高脂飼料喂養(yǎng)(A組,n=20)及單純高脂飼料喂養(yǎng)(B組,n=10)。
　　 2、稱量體重:實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)8周時(shí)分別對所有實(shí)驗(yàn)兔稱量體重。
　　 3、血脂檢測:分別于實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)8周時(shí)采血測定血清總膽固醇(TC),甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。
　　 4、在實(shí)驗(yàn)第8周時(shí)處死部分動(dòng)物(A組,n=9:B組,n=5),HE染色觀察頸動(dòng)脈病理學(xué)改變,斑塊的形成情況,內(nèi)膜與中膜

6、厚度以及其它的形態(tài)特征。其余兔子(A組,n=9:B組,n=5)頸動(dòng)脈局部注射液氮期望激發(fā)所形成的粥樣斑塊破裂,3d后處死所有兔子,再次觀察頸動(dòng)脈病變的形態(tài)特征。
　　 5、實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)8周時(shí)及液氮激發(fā)后3d分別抽血,采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbcnt assay,ELISA)檢測高敏C反應(yīng)蛋白(high sensitiveC-reactive protein,hs-CRP)及基質(zhì)金屬蛋白酶

7、-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)水平。
　　 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以(x)±s(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示,兩組均數(shù)比較以獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或配對樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行,多組均數(shù)間比較以O(shè)ne-Way ANOVA進(jìn)行,P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論
　　 1、改良的球囊損傷頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞術(shù)加高脂飼料喂養(yǎng)及液氮激發(fā)可以成功建立

8、兔頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂模型。
　　 2、本模型具有方法簡單、成?？?、價(jià)廉、可重復(fù)性好、動(dòng)物死亡率低及斑塊破裂率高等優(yōu)點(diǎn),為急性冠脈綜合征的基礎(chǔ)研究及臨床干預(yù)治療研究奠定基礎(chǔ)。
　　 目的：
　　 初步探討睪酮對雄兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響及其作用機(jī)制,為下一步急性冠脈綜合征的基礎(chǔ)研究及臨床干預(yù)治療提供理論依據(jù)。
　　 方法
　　 1、將66只雄性新西蘭兔隨機(jī)分為4組,其中正常對照組(A組)1

9、0只,喂以普通飼料；假去勢+球囊損傷頸動(dòng)脈組(B組)16只、去勢+球囊損傷頸動(dòng)脈+生理劑量睪酮(6mg.Kg-1.2周-1)肌肉注射組(C組)16只、去勢+球囊損傷頸動(dòng)脈+生理鹽水肌肉注射組(D組)24只均喂以高脂飼料。
　　 2、在實(shí)驗(yàn)第8周處死部分動(dòng)物(A組,n=5；B組,n=7 C組,n=7；D組,n=7),右頸動(dòng)脈病理切片行蘇木精-伊紅(HE)染色和Masson氏三色染色觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病理改變與斑塊面積、內(nèi)-中膜

10、厚度(intimal-media thickness,IMT)、纖維帽厚度、膠原含量變化以及其它的形態(tài)特征并作比較。所有兔抽血檢測睪酮、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidae,GSH-PX)、高敏C反應(yīng)蛋白(high sensitive C-reactive protein,hs-CRP)、基質(zhì)金屬

11、蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、血紅素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、脂聯(lián)素(adiponectin,APN)、血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)、腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin,ADM)、神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y,NPV)和降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)水

12、平。
　　 3、B、C、D組剩余兔子(B組,n=8；C組,n=8；D組,n=16)頸動(dòng)脈局部注射液氮激發(fā)所形成的粥樣斑塊破裂。然后將D組兔隨機(jī)再分為2組,D1組8只,D2組8只。B、C、D1組兔繼用原方案干預(yù)處理,D2組兔加用生理劑量睪酮(6mg.Kg-1.2周-1)肌肉注射,所有兔子均喂以普通飼料。
　　 4、6周后處死所有兔子,右頸動(dòng)脈病理切片行蘇木精-伊紅(HE)染色和Masson氏三色染色觀察動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病

13、理改變與斑塊面積、IMT、纖維帽厚度、膠原含量變化,免疫組織化學(xué)法及RT-PCR法檢測右頸動(dòng)脈斑塊內(nèi)CRP、MMP-9、HO-1、APN的表達(dá),放射免疫法檢測血睪酮水平并作比較。
　　 結(jié)論
　　 1、低睪酮血癥可以加重雄兔頸動(dòng)脈粥樣硬化程度,并可促使斑塊的穩(wěn)定性降低。
　　 2、內(nèi)源性睪酮可以一定程度的抑制雄兔頸動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展、并具有穩(wěn)定斑塊的作用。低睪酮血癥者補(bǔ)充外源性睪酮至生理水平具有和內(nèi)源性睪酮

14、相似的效果。
　　 3、低睪酮血癥可以導(dǎo)致體內(nèi)炎性、抗炎因子失衡,舒、縮血管活性物質(zhì)失衡及氧化、抗氧化系統(tǒng)失衡。
　　 4、升高體內(nèi)ADM、CGRP、HO-1、APN、SOD、GSH-PX,降低Ang Ⅱ、NPY、hs-CRP、MMP-9、MDA水平可能為睪酮抑制雄性動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化及增強(qiáng)斑塊穩(wěn)定性的作用機(jī)制之一。
　　 5、生理水平睪酮對破裂后斑塊同樣具有再穩(wěn)定作用。
　　 6、睪酮可以經(jīng)多條途徑抑制雄

15、性動(dòng)物動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展及增強(qiáng)斑塊穩(wěn)定性。
　　 目的：
　　 觀察男性不穩(wěn)定型心絞痛患者血清睪酮與hs-CRP、MMP-9、HO-1、APN、MDA、SOD和GSH-PX水平改變及相互間相關(guān)關(guān)系,進(jìn)一步探討睪酮在男性急性冠脈綜合征發(fā)病中的作用。
　　 方法
　　 90例研究對象分為3組,其中冠狀動(dòng)脈造影正常的對照組(A組)研究對象30例、不穩(wěn)定型心絞痛患者60例又分為睪酮正常組(B組)及低睪酮血癥組(

16、C組),三組研究對象均為男性。于入院24小時(shí)內(nèi)抽晨起空腹靜脈血放射免疫法測定血睪酮水平,ELISA試劑盒測定hs-CRP、MMP-9、HO-1、APN水平,硫代巴比妥酸法測血MDA,黃嘌呤氧化酶法測SOD,還原型谷胱甘肽消耗法測GSH-PX水平,各組間進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果
　　 各組間睪酮、hs-CRP、MMP-9、HO-1、APN、MDA、SOD及GSH-PX濃度經(jīng)單因素方差分析均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F分別=111.312

17、,38.965,193.434,299.884,54.342,51.767,219.301,101.791,P均<0.001)。經(jīng)組間多重比較,C組MMP-9、MDA水平均顯著高于B組和A組(C組vsB組:P分別<0.001,0.01；C組vsA組:P均<0.001),而C組HO-1、APN及SOD水平均顯著低于B組和A組(C組vsB組:P分別<0.001,0.001,0.01；C組vsA組:P均<0.001)。
　　 結(jié)論