齲齒DNA疫苗質(zhì)量控制方法的初步探討.pdf

1、世界衛(wèi)生組織(WHO)已將齲齒列為危害人類健康的三大非傳染性疾病之一，我國兒童齲齒的發(fā)病率高達(dá)80％，防治齲齒刻不容緩。靶向融合齲齒DNA疫苗(簡稱齲齒DNA疫苗)PGJA-P/VAX可以誘導(dǎo)產(chǎn)生唾液特異性SIgA抗體，目前已進(jìn)入中試階段，迫切需要建立一套與其相應(yīng)的檢測方法。 本實(shí)驗(yàn)論文按照國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)2003年頒布的《預(yù)防用DNA疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，初步探討了齲齒DNA疫苗的質(zhì)量控制方法。

2、 本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)齲齒DNA疫苗PGJA-P/VAX的菌種庫進(jìn)行了細(xì)菌革蘭氏染色，生化反應(yīng)試驗(yàn)，外源噬菌體檢查，限制性酶切分析、基因序列分析。結(jié)果表明該菌種的各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果與大腸桿菌相符，無噬菌體污染；質(zhì)粒限制性酶切圖譜及DNA測序與質(zhì)粒構(gòu)建圖譜相符證實(shí)為齲齒DNA疫苗。其次摸索了齲齒DNA疫苗產(chǎn)品的各項(xiàng)質(zhì)量檢測方法，包括采用分光光度法測定質(zhì)粒DNA濃度，瓊脂糖凝膠電泳法結(jié)合Bandscan生物軟件掃描及液相色譜法測定質(zhì)粒超螺旋比例，瓊脂糖

3、凝膠電泳檢測殘余宿主菌RNA，ELISA法定量測定殘余宿主菌菌體蛋白，鱟試劑凝膠法檢測內(nèi)毒素含量，地高辛標(biāo)記探針斑點(diǎn)雜交檢測殘余宿主菌基因組DNA，以及用康衛(wèi)皿檢測純化質(zhì)粒中殘留乙醇。 結(jié)果表明經(jīng)完整中試工藝純化后的質(zhì)粒分光光度計(jì)檢測OD260/OD280值介于1.75和1.85之間，質(zhì)粒超螺旋比例大于80％，瓊脂糖電泳無可見RNA帶型，殘余宿主菌菌體蛋白含量小于1ug蛋白/mg質(zhì)粒，內(nèi)毒素含量小于10EU/mg質(zhì)粒，質(zhì)粒中殘留