齲齒DNA疫苗質量控制方法的初步探討.pdf

1、世界衛(wèi)生組織(WHO)已將齲齒列為危害人類健康的三大非傳染性疾病之一，我國兒童齲齒的發(fā)病率高達80％，防治齲齒刻不容緩。靶向融合齲齒DNA疫苗(簡稱齲齒DNA疫苗)PGJA-P/VAX可以誘導產生唾液特異性SIgA抗體，目前已進入中試階段，迫切需要建立一套與其相應的檢測方法。 本實驗論文按照國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)2003年頒布的《預防用DNA疫苗臨床前研究技術指導原則》，初步探討了齲齒DNA疫苗的質量控制方法。

2、 本實驗首先對齲齒DNA疫苗PGJA-P/VAX的菌種庫進行了細菌革蘭氏染色，生化反應試驗，外源噬菌體檢查，限制性酶切分析、基因序列分析。結果表明該菌種的各項試驗結果與大腸桿菌相符，無噬菌體污染；質粒限制性酶切圖譜及DNA測序與質粒構建圖譜相符證實為齲齒DNA疫苗。其次摸索了齲齒DNA疫苗產品的各項質量檢測方法，包括采用分光光度法測定質粒DNA濃度，瓊脂糖凝膠電泳法結合Bandscan生物軟件掃描及液相色譜法測定質粒超螺旋比例，瓊脂糖

3、凝膠電泳檢測殘余宿主菌RNA，ELISA法定量測定殘余宿主菌菌體蛋白，鱟試劑凝膠法檢測內毒素含量，地高辛標記探針斑點雜交檢測殘余宿主菌基因組DNA，以及用康衛(wèi)皿檢測純化質粒中殘留乙醇。 結果表明經完整中試工藝純化后的質粒分光光度計檢測OD260/OD280值介于1.75和1.85之間，質粒超螺旋比例大于80％，瓊脂糖電泳無可見RNA帶型，殘余宿主菌菌體蛋白含量小于1ug蛋白/mg質粒，內毒素含量小于10EU/mg質粒，質粒中殘留