桃花的質(zhì)量控制方法研究.pdf

1、桃花來源于薔薇科植物桃 Prunus persica(L.) Batsch或山桃Prunus davidiana(Carr.) Franch.的花。《神農(nóng)本草經(jīng)》及《中華本草》等著作中均有記載和論述，但未收載于任何質(zhì)量標準中，其質(zhì)量難以有效控制。
　　本研究對11批桃花藥材進行了薄層色譜鑒別，對有效成分蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷進行了含量測定，在此基礎上對桃花藥材進行了高效液相色譜指紋圖譜分析，為桃花藥材質(zhì)量標準的制定奠定基礎。

2、r>　　目的：建立桃花藥材的薄層色譜鑒別、含量測定及指紋圖譜分析方法，為桃花藥材質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、薄層色譜方法的建立
　　試驗了多種提取溶劑及提取方式對目標成分斑點的影響，選擇適宜的薄層板吸附劑、展開條件及顯色條件等。
　　2、含量測定方法的建立
　　考察不同提取條件對桃花藥材中蘆丁、金絲桃苷和異槲皮苷的影響，選擇三種目標有效成分含量測定結果相對較高的提取條件。篩選最佳檢測波長，流動相

3、的組成、比例。繪制目標有效成分的標準曲線。驗證建立的測定方法的精密度、重復性、穩(wěn)定性和回收率。采用逐步稀釋的方法測定三種目標有效成分的檢測限。采用3個不同廠家的色譜柱、兩臺不同廠家的高效液相色譜儀分別測定3批桃花藥材的含量，驗證測定方法的耐用性。在選定的液相色譜條件下，測定11批桃花藥材中三種目標有效成分的含量。
　　3、指紋圖譜方法的建立
　　提取條件和色譜條件的選擇同含量測定項下。對建立的測定方法進行精密度、重復性和穩(wěn)定

4、性驗證試驗。在選定的液相色譜條件下，記錄11批次桃花藥材的指紋圖譜并對其進行相似度評價。
　　結果：
　　1、薄層色譜法
　　取桃花藥材粉末1.0 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，取續(xù)濾液。以乙酸乙酯-甲酸-水（30:3:2）為展開劑，以硅膠GF254為薄層板吸附劑，點樣量為2μL，顯色劑為5％三氯化鋁乙醇溶液，顯色條件為在105℃加熱3分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。樣品色譜與對比藥材色譜和對

5、照品色譜在相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
　　2、含量測定方法
　　25倍70%甲醇超聲提取30 min，濾過，取續(xù)濾液。采用Waters SunFire C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：以乙腈為流動相A，0.1%磷酸水溶液為流動相B，先以流動相A-流動相B(14:86)等度洗脫，待異槲皮苷峰洗脫完畢后進行線性梯度洗脫（0～5 min，14%A→60%A；5～20 min，60%A；20～25

6、min，60%A→14%A）；檢測波長為353 nm；流速1.0 mL·min-1；柱溫為30℃，進樣量為20μL。在此色譜條件下，理論板數(shù)按異槲皮苷峰計算應不低于5000。蘆丁在1.00～201.72μg·mL-1范圍內(nèi)，線性關系良好；金絲桃苷在1.00～200.54μg·mL-1范圍內(nèi)，線性關系良好；異槲皮苷在1.00～201.72μg·mL-1范圍內(nèi)，線性關系良好。精密度良好，相對標準偏差分別為1.9%、1.9%、1.3%。重復性

7、良好，相對標準偏差分別為1.4%、1.8%、1.2%。樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定，相對標準偏差分別為1.9%、1.9%、1.4%。樣品中蘆丁的平均回收率為101.4%，相對標準偏差為3.8%；金絲桃苷的平均回收率為102.2%，相對標準偏差為2.8%；異槲皮苷的平均回收率為102.7%，相對標準偏差為2.0%。三種目標有效成分的檢測限分別為0.10、0.10、0.10μg。色譜柱耐用性和儀器耐用性均較好。所選桃花藥材中三種目標有效成分的含量測

8、定結果范圍分別為0.053%～0.29%、0.030%～0.082%、0.11%～0.32%。
　　3、指紋圖譜方法
　　25倍70%甲醇超聲提取30 min，濾過，取續(xù)濾液。采用SunFire C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸水溶液為流動相B，先以A-B(14:86)等度洗脫，待異槲皮苷峰洗脫完畢后進行線性梯度洗脫(0～20 min，14%A→20%A；20～40 min

9、，20%A→60%A；40～45 min，60%A→14%A)，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為353 nm，柱溫為30℃，進樣量為20μL。方法精密度良好，相對保留時間和相對峰面積的相對標準偏差分別為0.08%～1.36%和1.43%～2.72%。重復性良好，相對保留時間和相對峰面積的相對標準偏差分別為0.07%～0.62%和1.45%～2.14%。樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，相對保留時間和相對峰面積均無顯著差異，其相對標準

10、偏差分別為0.08%～1.36%和1.43%～2.72%。建立了桃花藥材的指紋圖譜分析方法，并對11批次不同基源、不同產(chǎn)地的桃花藥材進行了的指紋圖譜檢測。運用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2.0版”（國家藥典委員會開發(fā)）對植物桃花藥材和山桃花藥材的指紋圖譜分別進行了分析比較，并進行了相似度計算和偏差分析。
　　結論：
　　1、薄層色譜
　　該方法所得色譜斑點清晰可辨，分離效果良好，方法耐用性較好，可對桃花藥材進行有效