蓽澄茄質(zhì)量控制方法研究.pdf

1、蓽澄茄系樟科植物山雞椒Litseacubeba(Lour．)pers．的干燥成熟果實，收載于《中國藥典》2005年版(一部)，具有溫中散寒、行氣止痛之功效，用于胃寒嘔逆、脘腹冷痛、寒疝腹痛、寒濕郁滯和小便渾濁等病癥[1]。 本研究以蓽澄茄為研究對象，在對其化學(xué)成分進(jìn)行提取分離的基礎(chǔ)上，建立了蘆丁含量測定的反相高效液相色譜法、總黃酮含量測定的紫外分光光度法、揮發(fā)油中6種成分同時含量測定的毛細(xì)管氣相色譜法，同時進(jìn)行了高效液相色譜指紋

2、圖譜的研究，較系統(tǒng)的評價了蓽澄茄的質(zhì)量，為蓽澄茄的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 本研究采用硅膠柱層析、凝膠柱層析和半制備液相等多種色譜分離技術(shù)，從蓽澄茄80％乙醇提取物中分離得到5個化合物，通過理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)分析，鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)苷分別為：十六烷酸(hexadecanoicacid)、異東莨菪內(nèi)酯(isoscopletin)、蘆丁(rutin)、胡蘿卜苷(daucosterol)和12，16-二羥基-55-亞硝基-2-氨基-6-氧雜-1

3、(1，3，4)，5(1，2，4)-二苯基雙環(huán)[3.2.0]庚烷-7-酮(12，16-dihydroxy-55-nitroso-2-aza-6-oxa-1(1，3，4)，5(1，2，4)-dibenzenabicyclo[3.2.0]heptan-7-one)。其中，十六烷酸和蘆丁為首次從該植物中分離得到，異東莨菪內(nèi)酯為首次從該屬植物中分離得到，12，16-二羥基-55-亞硝基-2-氨基-6-氧雜-1(1，3，4)，5(1，2，4)-二苯

4、基雙環(huán)[3.2.1]庚烷-7-酮為新化合物。 本研究首次建立了測定不同產(chǎn)地蓽澄茄中蘆丁含量的反相高效液相色譜法。采用KromasilC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-0.05％磷酸(38：62)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為254nm。采用正交試驗設(shè)計，對蘆丁的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最佳提取條件為20倍量甲醇加熱回流提取2次，每次20min。蘆丁在1.664～62.40μgml/L(r=0.9

5、994)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，提取回收率為101.2％，RSD=2.3％。結(jié)果表明，該方法簡單、準(zhǔn)確、可靠，為蓽澄茄的質(zhì)量控制提供依據(jù)。 本研究采用比色法測定了不同產(chǎn)地蓽澄茄中總黃酮的含量。以蘆丁為對照品，在500nm波長下測定吸光度，計算總黃酮含量。結(jié)合單因素試驗和正交試驗設(shè)計法，對蓽澄茄中總黃酮的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，最佳提取條件是：30倍50％乙醇在60℃水浴加熱回流提取1h。蘆丁對照品在8.05～48.29μgml/L(r

6、=1.0)范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，方法回收率為99.2％，RSD=1.8％。 本研究建立了同時測定不同產(chǎn)地蓽澄茄揮發(fā)油中α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、檸檬烯、6-甲基-5-庚烯-2-酮和檸檬醛6種成分含量的氣相色譜法。通過水蒸氣蒸餾法進(jìn)行揮發(fā)油的提取，采用DB-17石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)；檢測器為氫火焰離子檢測器(FID)；進(jìn)樣口溫度為230℃；檢測器溫度為250℃；升溫程序為起始溫度50℃，

7、以2℃/min升至80℃，再以10℃/min升至240℃，保持10min；載氣為氮氣，流速為1.2mL/min；進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為10：1。α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、檸檬烯、6-甲基-5-庚烯-2-酮和檸檬醛的線性范圍分別為0.01829～0.914mgml/L(r=0.9999)，0.00992～0.4960mgml/L(r=0.9999)，0.00956～0.4780mgml/L(r=0.9999)，0.1013～5.0

8、64mgml/L；(r=1.0)，0.0947～4.734mg·mL—·(r=0.9999)和0.1461～7.350mgml/L(r=0.9999)；平均回收率(n=9)分別為99.2％(RSD=3.1％)，99.0％(RSD=3.2％)，100.5％(RSD=3.3％)，100.4％(RSD=1.4％)，99.1％(RSD=1.7％)和97.7％(RSD=2.6％)。結(jié)果表明，該方法簡單、準(zhǔn)確、可靠，為蓽澄茄的質(zhì)量控制提供了方法。

9、 本研究首次建立了蓽澄茄高效液相色譜指紋圖譜研究方法。采用PromosilC18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈-0.05％磷酸水溶液進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0mL/min，檢測波長為254和268nm。對16批蓽澄茄樣品色譜指紋圖譜進(jìn)行分析，獲得14個共有峰，并對其中的蘆丁、異東莨菪內(nèi)酯、檸檬醛a和檸檬醛b色譜峰進(jìn)行了指認(rèn)。采用組間均聯(lián)法(between-groupslinkage)，以余弦(cosine)