駱駝蓬總堿致突變性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：①通過高效液相色譜法（HPLC）檢測駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量，以作為總堿提取的質(zhì)控指標(biāo)。②通過鼠傷寒沙門氏菌營養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子致畸試驗(yàn)，觀測駱駝蓬總堿的致突變性反應(yīng)，對駱駝蓬總堿的致突變性毒性反應(yīng)發(fā)生的危害程度進(jìn)行安全性評價，為擬開發(fā)抗消化系統(tǒng)惡性腫瘤的新藥駱駝蓬總堿提供安全用藥劑量的參考范圍。
　　 方法：⑴駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量測定：通過高效液相（HPLC）色譜

2、法，檢測駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量。色譜柱：十八烷基硅烷硅膠填充柱；流動相：甲醇-0.01 mol·L-1硫酸銨溶液-二乙胺(60∶40∶0.4)；檢測波長320 nm。⑵致突變試驗(yàn)：鼠傷寒沙門氏菌營養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變試驗(yàn)(Ames試驗(yàn)) ：采用平板摻入法，設(shè)4個劑量組分別為40、200、1000、5000μg/皿，溶劑為二甲基亞砜，同時設(shè)有陽性物對照組、溶劑對照組和未處理對照組，均包括加S-9和不加S-9兩種情況；小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)

3、胞微核試驗(yàn)：通過對昆明種小鼠灌胃給藥229.68、114.84、57.42mg/kg三個劑量的駱駝蓬總堿混懸液，觀察駱駝蓬總堿對小鼠骨髓細(xì)胞的致突變作用及細(xì)胞毒性反應(yīng)；小鼠精子致畸試驗(yàn)：通過對昆明種雄性小鼠灌胃給藥574.21、287.11、143.55mg/kg三個劑量的駱駝蓬總堿混懸液，觀察駱駝蓬總堿對小鼠精子的致突變作用。
　　 結(jié)果：①駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量測定：所測駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量為10.88％；

4、駱駝蓬種子中去氫駱駝蓬堿的含量為3.64％。②致突變試驗(yàn)：鼠傷寒沙門氏菌營養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變試驗(yàn)(Ames試驗(yàn)) ：各組在加與不加S-9的情況下，其回變菌落數(shù)均未超過其自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍；小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)：駱駝蓬總堿各劑量組內(nèi)雌、雄小鼠的骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率均在正常范圍內(nèi)，且未見有劑量依賴性關(guān)系，嗜多染紅細(xì)胞/成熟紅細(xì)胞（PCE/NCE）的比值也在正常值范圍之內(nèi)。駱駝蓬總堿三個劑量組對小鼠骨髓微核率的影響，與對照組比較差異無顯

5、著性意義（P>0.05）；小鼠精子致畸試驗(yàn)：駱駝蓬總堿各劑量組的精子畸形率均在正常范圍之內(nèi)，且未見有劑量依賴性關(guān)系。駱駝蓬總堿三個劑量組對精子畸形率的影響與對照組比較差異亦無顯著性意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：⑴駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量為10.88％；駱駝蓬種子中去氫駱駝蓬堿的含量為3.64％。本實(shí)驗(yàn)所測駱駝蓬總堿中去氫駱駝蓬堿的含量與文獻(xiàn)報道基本相符。⑵在本實(shí)驗(yàn)條件下，對駱駝蓬總堿所進(jìn)行的致突變試驗(yàn)各項(xiàng)觀測指標(biāo)檢測