胰島素樣生長因子基因表達(dá)與人類植入前胚胎發(fā)育的研究.pdf

1、應(yīng)用巢式RT-PCR方法檢測人卵母細(xì)胞及各發(fā)育階段的人類植入前胚胎中IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ的表達(dá)，探討其在植入前胚胎發(fā)育中的生物學(xué)意義。通過熒光定量RT-PCR的技術(shù)，建立單個(gè)植入前胚胎的mRNA定量的檢測方法，并同時(shí)探討IGF-Ⅱ的表達(dá)與人植入前胚胎質(zhì)量的關(guān)系。第一部分胰島素樣生長因子在人植入前胚胎細(xì)胞中的表達(dá)材料：收集行常規(guī)IVF和ICSI患者不受精的成熟卵母細(xì)胞25個(gè)。收集行常規(guī)IVF和ICSI患者及PGD后不適合移植及冷凍保存的

2、胚胎129個(gè)，其中3原核(3PN)胚胎52個(gè)，雙原核(2PN)胚胎65個(gè)，由廢胚繼續(xù)培養(yǎng)得到桑椹胚10個(gè)、囊胚12個(gè)。方法：單個(gè)細(xì)胞裂解液制備卵母細(xì)胞及胚胎總RNA；逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；巢式PCR選擇擴(kuò)增IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ基因，內(nèi)參照選擇基因β-actin。擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳?！　〉诙糠忠葝u素樣生長因子-Ⅱ基因表達(dá)與人植入前胚胎的質(zhì)量的研究材料：收集行常規(guī)IVF和ICSI患者及PGD后不適合移植及冷凍保存的胚胎172個(gè)。其

3、中3PN胚胎44個(gè)，2PN胚胎128個(gè)。每一個(gè)胚胎均進(jìn)行常規(guī)的胚胎評分(包括原核期評分和第三天的細(xì)胞數(shù)及分級)。 結(jié)論1.人類未受精的卵母細(xì)胞及植入前各階段胚胎均未檢測到IGF-Ⅰ表達(dá)，而所有的卵母細(xì)胞及各階段胚胎均有IGF-Ⅱ的表達(dá)。2.熒光定量RT-PCR技術(shù)可用于檢測單個(gè)植入前胚胎的mRNA含量，從而可作為一個(gè)更為精確的進(jìn)行胚胎早期發(fā)育調(diào)控研究的實(shí)驗(yàn)工具。3.IGF-Ⅱ可作為胚胎質(zhì)量的標(biāo)記物；IGF-Ⅱ基因表達(dá)量和胚胎的形