重慶人IL-18及其受體基因啟動(dòng)子多態(tài)性與結(jié)核易感性的關(guān)系.pdf

1、背景：結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MT)感染所致。近20年結(jié)核病在全球出現(xiàn)“復(fù)燃”趨勢(shì)，全世界人口結(jié)核感染率為33.3％，而我國人口結(jié)核感染率為44.5％，是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核病患者數(shù)位居全球第二。近五年重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院結(jié)核病住院人數(shù)明顯增加。 同卵雙胞胎同時(shí)患結(jié)核機(jī)會(huì)明顯大于異卵雙胞胎，不同種族之間結(jié)核感染率有差異，提示宿主遺傳背景影響著對(duì)結(jié)核的抵抗力

2、和易感性。作為第三代遺傳標(biāo)記的單核苷酸多態(tài)性(SNP)直接以序列差異作為標(biāo)記，比其他遺傳標(biāo)記更能真實(shí)的反映人種、人群及個(gè)體之間的遺傳差異。所以，研究SNP與疾病的關(guān)系對(duì)研究疾病發(fā)生的遺傳學(xué)背景，探索人類疾病的新型防治措施有重要意義。結(jié)核病的防御機(jī)制主要是細(xì)胞免疫，其中TH1型細(xì)胞介導(dǎo)的免疫機(jī)制起關(guān)鍵作用，IFN-γ及其誘生因子IL-12、IL-18等均被認(rèn)為是免疫防御結(jié)核菌的關(guān)鍵性角色。IL-18是一種新型IFN-γ誘生因子，能觸發(fā)自然

3、殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)和TH1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，并促使TH1細(xì)胞、NK細(xì)胞增殖和發(fā)揮細(xì)胞毒活性。 IL-18基因多態(tài)性影響IL-18的表達(dá)：IL-18基因啟動(dòng)子區(qū)域(起始密碼前)-137和-607位核苷酸存在單核苷酸多態(tài)性(SNP)，-137由G變?yōu)镃和-607由C變?yōu)锳將分別改變組蛋白H4基因獨(dú)特性轉(zhuǎn)錄因子(H4TF-1)和核因子cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，影響它們與IL-18基因啟動(dòng)子的結(jié)合能力，可能影響IL-18表

4、達(dá)水平，并進(jìn)一步影響IFN-γ表達(dá)水平及TH1型細(xì)胞免疫功能。IL-18需與IL-18受體結(jié)合才能發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，因此，IL-18受體(由α、β異二聚體組成)表達(dá)水平也將影響IL-18誘導(dǎo)IFN-γ產(chǎn)生和抗結(jié)核感染效應(yīng)。IL-18Rα，基因啟動(dòng)子區(qū)-69和-638位核苷酸存在SNP，不同IL-18Rα SNP可能影響其表達(dá)水平。目前國內(nèi)外尚未見IL-18及其受體α鏈(IL-18Rα)基因啟動(dòng)子多態(tài)性與結(jié)核易感性的研究報(bào)道。 目的

5、：分析重慶兒童結(jié)核病人的臨床及輔助檢查特點(diǎn)；重點(diǎn)研究IL-18(-137G/C和-607C/A)及IL-18Rα(-69C/T和-638C/T)基因啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性(SNP)與重慶結(jié)核病發(fā)病的相關(guān)性；揭示其在重慶人結(jié)核易感性方面的影響。 方法：隨機(jī)選取重慶住院和門診隨訪確診的兒童結(jié)核91例和成人結(jié)核32例；健康兒童167名和健康成人82名作對(duì)照；對(duì)重慶兒童結(jié)核病臨床特點(diǎn)及輔助檢查進(jìn)行回顧性分析；應(yīng)用序列特異性引物-聚合酶聯(lián)反

6、應(yīng)(PCR-SSP)法分析IL-18及其受體α鏈基因多態(tài)性。 結(jié)果： 1、重慶兒童結(jié)核中，發(fā)生結(jié)核性腦膜炎(結(jié)腦)的比率，有結(jié)核接觸史者明顯高于無結(jié)核接觸史者(P<0.05)。 2、未接種卡介苗的兒童結(jié)腦發(fā)病率高于接種了卡介苗的兒童。 3、重慶兒童結(jié)核PPD試驗(yàn)陽性者中抗酸桿菌涂片陽性者明顯高于涂片陰性者(P<0.05)。 4、IL-18基因-137位多態(tài)性：結(jié)核患兒IL-18 -137位GG基因

7、型頻率明顯高于健康對(duì)照(P<0.05)，GC和CC基因型與健康對(duì)照比較均無明顯差別；等位基因C明顯低于健康對(duì)照(P<0.05)。成人結(jié)核-137位各基因型及等位基因頻率和健康成人比較無明顯差別(P>0.05)?？偨Y(jié)核病人(兒童+成人)-137位GG基因型明顯高于總正常對(duì)照(兒童+成人)(P<0.05)，GC和CC基因型分布頻率和對(duì)照比較無明顯差別(P>0.05)；等位基因C明顯低于總正常對(duì)照(P<0.05)。 5、IL-18基因

8、-607位多態(tài)性：各結(jié)核病人組(兒童結(jié)核、成人結(jié)核及兒童+成人結(jié)核)IL-18 -607位各基因型和等位基因頻率和相應(yīng)的正常對(duì)照比較均無明顯差異(P>0.05)。 6、IL-18Rα基因-69位多態(tài)性：結(jié)核患兒IL-18Rα-69位CC基因型明顯低于正常對(duì)照(P<0.01)， CT 和TT基因型頻率與正常對(duì)照比較無明顯差別；等位基因C明顯低于正常對(duì)照(P<0.01)。成人結(jié)核-69位各基因型及等位基因頻率與正常對(duì)照比較均無明顯差

9、別(P>0.05)?？偨Y(jié)核病人(兒童+成人)-69位CC基因型明顯低于總正常對(duì)照(兒童+成人)(P<0.01)，TT基因型頻率明顯高于總正常對(duì)照(P<0.05)，CT基因型與正常對(duì)照比較無明顯差異(P>0.05)；總結(jié)核病人等位基因C明顯低于正常對(duì)照(P<0.01)；-69位等位基因頻率肺結(jié)核、肺外結(jié)核和肺結(jié)核+肺外結(jié)核三組比較有明顯差異(P<0.01)。 7、IL-18Rα基因-638位多態(tài)性：各結(jié)核病人組(兒童結(jié)核、成人結(jié)核

10、及兒童+成人結(jié)核)IL-18Rα-638位各基因型和等位基因頻率與正常對(duì)照比較均無明顯差異(P>0.05)。而結(jié)腦患兒等位基因C的頻率明顯低于其他結(jié)核，嚴(yán)重結(jié)核患兒等位基因C的頻率明顯低于一般結(jié)核組(P<0.01)。 結(jié)論： 1、目前預(yù)防小兒結(jié)核病尤其是結(jié)核性腦膜炎最重要的方法是防止小兒受到結(jié)核感染以及成功接種卡介苗。 2、重慶兒童結(jié)核PPD試驗(yàn)陽性者中抗酸桿菌涂片(涂菌)陽性患兒明顯高于涂菌陰性者(P<0.05