磷脂酶A-,2-在SD大鼠NAFLD肝細(xì)胞脂性凋亡中的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景
　　 非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明確的肝損因素所致的以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合癥,包括非酒精性單純性脂肪肝以及由其演變的非酒精性脂肪肝炎和肝硬變,肝細(xì)胞脂性凋亡是NAFLD最具特征的病理表現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)游離脂肪酸(FFA)的代謝失衡是導(dǎo)致脂肪肝的最主要原因,特別是FFA介導(dǎo)的肝細(xì)胞的過(guò)度脂性凋亡是NAFLD發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵,但其確切發(fā)病機(jī)制尚不明了。近年來(lái)研究表明:NAFL

2、D患者肝臟內(nèi)大部分的FFAs是進(jìn)入非氧化代謝途徑而非傳統(tǒng)的β氧化途徑,非氧化代謝產(chǎn)生的活性脂肪酸衍生分子可能是導(dǎo)致肝細(xì)胞脂性凋亡的關(guān)鍵因素。FFAs向磷脂酸/二酰基甘油(DAG)途徑進(jìn)行代謝更容易導(dǎo)致肝細(xì)胞脂性凋亡,升高的DAG在膽堿磷酸轉(zhuǎn)移酶等催化作用下迅速合成磷脂酰膽堿(PC),進(jìn)一步激活磷脂酶,溶解細(xì)胞膜中的磷脂酰膽堿而釋放出溶血磷脂酰膽堿(LPC),而LPC是氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)的重要脂質(zhì)成分,是引起多種細(xì)胞凋亡的關(guān)

3、鍵分子。所有磷脂酶中只有磷脂酶A2(PLA2)專(zhuān)一水解甘油磷脂2-酰酯鍵,產(chǎn)生溶血磷脂和游離脂肪酸。那么PLA2/LPC代謝途徑在肝細(xì)胞脂性凋亡中是否起重要作用,PLA2或其某一亞型的異?；罨遣皇瞧潢P(guān)鍵性的分子事件,目前不清楚。
　　 本研究通過(guò)建立高脂飲食誘導(dǎo)的SD大鼠NAFLD模型,模擬人體內(nèi)的發(fā)病過(guò)程,通過(guò)分析在體肝細(xì)胞的基本病理變化(脂質(zhì)聚集、凋亡程度、電鏡形態(tài))與PLA2及其亞型(sPLA2、cPLA2、iPLA2)

4、表達(dá)水平、酶活性等變化的關(guān)系;進(jìn)一步通過(guò)分析PLA2抑制劑(藥物阻斷技術(shù))對(duì)肝細(xì)胞脂性凋亡的影響,以揭示:PLA2在FFA致肝細(xì)胞脂性凋亡過(guò)程中的作用。因此,本項(xiàng)目將初步闡明FFA致肝細(xì)胞過(guò)度脂性凋亡的具體分子機(jī)制,為臨床NAFLD的防治提供新的靶點(diǎn)和思路。
　　 目的
　　 分析NAFLD大鼠模型肝細(xì)胞的基本病理變化與PLA2及其亞型的關(guān)系及PLA2抑制劑(藥物阻斷技術(shù))對(duì)肝細(xì)胞脂性凋亡的影響,以揭示PLA2在FFA致

5、肝細(xì)胞脂性凋亡過(guò)程中的作用。
　　 方法：
　　 把52只雄性SD大鼠,質(zhì)量150～170g,鼠齡4～6 wk。隨機(jī)分成6組:普通飲食喂養(yǎng)組(Ⅰ組)12只喂養(yǎng)18周,空白高脂飲食喂養(yǎng)組(Ⅱ組)8只、鈣依賴(lài)性和非鈣依賴(lài)性PLA2總體抑制劑(MAFP)干預(yù)組(Ⅲ組)8只、胞漿型PLA2抑制劑(ACCOCF3)干預(yù)組(Ⅳ組)8只、鈣非依賴(lài)性PLA2抑制劑(BEL)干預(yù)組(Ⅴ組)8只、分泌型PLA2抑制劑干預(yù)組(Ⅵ組)8只,Ⅱ～

6、Ⅵ組高脂喂養(yǎng)14周后分別予以二甲基亞砜(DMSO)、MAFP、ACCOCF3、BEL、sPLA2抑制劑腹腔注射,隔天1次,共14次。喂養(yǎng)結(jié)束同時(shí)處死。測(cè)定大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、脂蛋白a(Lpa)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、游離脂肪酸(FFA)、胞漿型磷脂酶A2(c PLA2)、分泌型磷脂酶A2(s

7、PLA2)、鈣非依賴(lài)性磷脂酶A2(iPLA2)、瘦素(Leptin)等指標(biāo),檢測(cè)肝各類(lèi)PLA2mRNA的表達(dá),在光鏡下觀察大鼠肝臟形態(tài)學(xué)改變,在透射電鏡下觀察肝細(xì)胞、線粒體及其他細(xì)胞外基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果：
　　 與普通飲食喂養(yǎng)組比較高脂飲食組病理結(jié)果存在明顯的脂肪變性及凋亡,電鏡下可見(jiàn)線粒體腫脹脊紊亂,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒,血cPLA2及iPLA2濃度明顯增高,同時(shí)肝cPLA2、iPLA2 mRNA表達(dá)明顯增高;各

8、干預(yù)組之間比較iPLA2及cPLA2抑制劑處理組肝細(xì)胞的凋亡較其他各組有所減少,線粒體的損傷也較輕。而且在FINS、HOMA-IR、IAI、瘦素、血cPLA2、血iPLA2有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p≤0.05)。同時(shí)兩兩比較發(fā)現(xiàn)cPLA2抑制劑干預(yù)組的血清瘦素濃度明顯低于各組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05);iPLA2抑制劑干預(yù)組的FINS、HOMA-IR較其他各組下降,IAI較其他各組上升,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.05)。
　　 結(jié)論：