白眉蝮蛇蛇毒Gln49磷脂酶A-,2-的細(xì)胞毒性研究.pdf

1、長(zhǎng)白山白眉蝮蛇(Agkistrodonblomhoffiiussurensis)蛇毒Gln49磷脂酶A2同源物，經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)為一條帶，分子量為16kDa左右。具有抗凝血活性、肌肉毒性，但缺乏磷脂酶A2活性。本文通過(guò)該蛋白質(zhì)對(duì)不同細(xì)胞生長(zhǎng)的影響以及細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的分析，表明其具有細(xì)胞毒性。 MTT方法檢測(cè)結(jié)果表明：Gln49-PLA2對(duì)MCF-7、Hela、ECV-304、K562和HL60五種細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，且毒性作

2、用存在時(shí)間和劑量依賴(lài)性；對(duì)K562和MCF-7細(xì)胞的半數(shù)有效劑量(IC50)分別為13μmol/L和1.2μmol/L。在給藥濃度為半數(shù)有效劑量，作用8小時(shí)條件下，光學(xué)顯微鏡觀(guān)察到K562細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞碎片，MCF-7細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁面，表明Gln49-PLA2能夠抑制兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)，并具有毒性作用。 LDH方法檢測(cè)結(jié)果表明：Gln49-PLA2引起K562和MCF-7細(xì)胞乳酸脫氫酶的釋放，改變了細(xì)胞膜的通透性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果

3、表明：該蛋白終濃度達(dá)28μmol/L，K562細(xì)胞凋亡比率為21﹪，終濃度達(dá)5μmol/L，MCF-7細(xì)胞凋亡比率為22.6﹪；隨著蛋白用量增加，兩種細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位均下降，進(jìn)一步表明Gln49-PLA2誘導(dǎo)兩種細(xì)胞發(fā)生凋亡；隨著該蛋白濃度的增加，K562細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化，MCF-7細(xì)胞的Bcl-2蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，提示Gln49-PLA2在誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡過(guò)程中，Bcl-2的調(diào)控作用不占重要地位。Caspa