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文檔簡介
1、脈管性疾病(Vascular anomalies)包括血管瘤(Hemangioma)和脈管畸形(Vascular malformation)二大類,可發(fā)生于全身各個部位,其中發(fā)生于頭頸部的脈管性疾病約占全身同類疾病的4096~60%,除了造成美容缺陷外,還可引起相應(yīng)功能障礙,給患者帶來極大的精神創(chuàng)傷和心理負(fù)擔(dān)。靜脈石為頭頸部靜脈畸形中較常檢出的病理性礦化灶,伴隨著疾病的發(fā)展。一般認(rèn)為,靜脈石是由于病灶內(nèi)血流動力學(xué)改變,血液中的鹽類物質(zhì)沉
2、積并形成血栓,血栓進(jìn)一步鈣化所形成。然而,此礦化機(jī)制尚屬推測,因此有必要進(jìn)一步探討靜脈石的生物礦化機(jī)制。本研究從靜脈石的角度出發(fā),探討靜脈畸形的病理機(jī)制,目的在于深入認(rèn)識靜脈畸形的病理過程,在此基礎(chǔ)上以期預(yù)防、調(diào)整,甚至逆轉(zhuǎn)靜脈石的形成,獲得更好的治療效果。 生物礦化(Biomineralization)是指有機(jī)體調(diào)控下形成礦物質(zhì)的過程。當(dāng)機(jī)體對生物礦化調(diào)控作用失衡,無機(jī)離子在不該礦化的部位形成異位礦化或異常礦化組織,或造成礦化
3、組織礦化過度或不足稱為病理性礦化(Pathologicalmineralization)。感染是影響病理性礦化過程的一個重要因素。上世紀(jì)八十年代后期,芬蘭科學(xué)家Kajander等在進(jìn)行哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)存在一種超微原核微生物,認(rèn)為此微生物可能來自細(xì)胞培養(yǎng)所需的胎牛血清。1990年Kajander正式將這種原核微生物命名為納米細(xì)菌(Nanobacteria, NB),并申請了專利。近年這種超微結(jié)構(gòu)亦被稱為鈣化性納米顆粒(Cal
4、cifyingNanoparticles,CNP)。納米細(xì)菌廣泛存在于自然界的礦物質(zhì)中和生物體內(nèi),是一種人畜共患的致病原,能感染人類和其它哺乳動物的任何組織和細(xì)胞,其生長過程中能在菌體周圍產(chǎn)生堅硬的礦化外殼,作為結(jié)晶核心,導(dǎo)致被感染組織或細(xì)胞發(fā)生病理性礦化。研究發(fā)現(xiàn),納米細(xì)菌與人體內(nèi)多種組織的病理性鈣化和硬化的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。 納米細(xì)菌的提出,為研究靜脈石的礦化機(jī)制提供一個新的切入點,因此我們設(shè)想納米細(xì)菌與靜脈石的形成相關(guān)。本研
5、究首先對靜脈石進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分分析,再試圖從靜脈石中分離、培養(yǎng)出納米細(xì)菌,以探索靜脈石的生物礦化機(jī)制。 第一部分:靜脈石的超微結(jié)構(gòu)分析 目的:明確靜脈石的超微結(jié)構(gòu)。 方法:5例靜脈石,過中心剖開,分別從內(nèi)部和外層各取一小塊,噴金處理后,掃描電子顯微鏡(Scanning Electron Microscope,SEM)下觀察其超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:SEM下發(fā)現(xiàn)靜脈石由內(nèi)至外呈同心圓板層狀結(jié)構(gòu),4例靜脈石內(nèi)
6、部和外層的超微結(jié)構(gòu)均以針狀晶體為常見,該晶體與羥基磷灰石相似;1例靜脈石內(nèi)部亦以針狀晶體為主,而外層為緊密排列的條索狀結(jié)構(gòu)。 結(jié)論:靜脈石的形成過程為先形成礦化核心,其他物質(zhì)圍繞核心呈同心圓逐層沉積而成,其內(nèi)可能含羥基磷灰石晶體。 第二部分:靜脈石的化學(xué)成分分析 目的:明確靜脈石的化學(xué)成分組成。 方法:5例靜脈石,過中心剖開,分別從內(nèi)部和外層各取一小塊,能量色散型X一射線分析儀(Energy Disper
7、sive X-ray spectrometry, EDS)下分別定量檢測靜脈石內(nèi)部和外層的元素組成。另取一小塊研成粉末,X-射線衍射分析儀(X-ray diffraction analysis,XRD)下進(jìn)行物相分析。 結(jié)果:EDS下3例靜脈石內(nèi)部和外層含有的元素依次為氧、鈣、磷、鈉、鎂,前三者質(zhì)量含量超過98%,另外2例靜脈石內(nèi)部和外層還有較高含量的碳元素。4例靜脈石鈣磷質(zhì)量及原子比值在內(nèi)部和外層都較接近,質(zhì)量比為1.73~
8、2.35:1,原子比為1.34~1.81:1。5例靜脈石鈣磷含量平均值的質(zhì)量及原子比在內(nèi)部分別為2.15:1和1.67:1,在外層分別為1.83:l和1.41:1。XRD物相分析顯示4例靜脈石為羥基磷灰石結(jié)晶,1例靜脈石為非結(jié)晶物質(zhì)。 結(jié)論:靜脈石的形成過程為有機(jī)物呈同心圓樣逐層沉積,并由內(nèi)至外逐步礦化為無機(jī)物而成,其晶相為羥基磷灰石晶體。 第三部分:靜脈石中納米細(xì)菌的分離、培養(yǎng)與初步鑒定 目的:明確靜脈石的形成
9、是否與納米細(xì)菌相關(guān),以探索靜脈石的生物礦化機(jī)制。 方法:靜脈石中納米細(xì)菌的分離和培養(yǎng):14例靜脈石脫礦后研碎,重懸粉末,離心,收集上清經(jīng)O.22p,m濾器過濾至培養(yǎng)瓶,加入含10% γ-射線滅活的胎牛血清(FBS)的DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium),在37℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。納米細(xì)菌的初步鑒定:倒置相差顯微鏡觀察該菌形態(tài)及生長特性,單克隆抗體8D10和G1B8免疫細(xì)胞
10、化學(xué)染色和間接免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色檢測納米細(xì)菌抗原,透射電鏡(Transmission electron microscope,TEM)觀察培養(yǎng)細(xì)菌的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:78.6%(11/14)的靜脈石分離、培養(yǎng)出納米細(xì)菌樣顆粒,其形態(tài)學(xué)特征和生長特性與納米細(xì)菌相似,單克隆抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色和間接免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽性,電鏡觀察到納米大小菌樣顆粒。 結(jié)論:從靜脈石中能分離到納米細(xì)菌,該菌可能在靜脈石的形成中起重要作
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