股骨頭缺血性壞死細(xì)胞凋亡及比較蛋白質(zhì)組學(xué)初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：無水酒精致骨細(xì)胞凋亡模擬人類股骨頭缺血性壞死的病理改變制作動物模型；體外探討激素聯(lián)合缺氧誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制；比較蛋白質(zhì)組學(xué)篩選人股骨頭壞死骨組織的差異蛋白。
　　 方法：綿羊12只，雙側(cè)股骨頭中心緩慢注入醫(yī)用無水酒精，術(shù)后4、8、12、25周進(jìn)行大體觀察、X線、MRI、組織學(xué)檢測。小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1分別在正常狀態(tài)、地塞米松中(10-6M)、缺氧中(1％氧濃度)、缺氧聯(lián)合地塞米松中培養(yǎng)；通過流式細(xì)胞儀、West

2、ern-Blot、RT-PCR等檢測細(xì)胞凋亡率、Caspases、Bax和Bcl-2、線粒體膜勢能和細(xì)胞色素C釋放。分別將激素組、創(chuàng)傷組、酒精組、特發(fā)組和正常組設(shè)為A，B，C，D，E組。取各組股骨頭壞死病灶內(nèi)骨組織各10例，及股骨頸處骨組織各10例。一是將蛋白質(zhì)經(jīng)2-DE分離純化，用肽質(zhì)量指紋圖譜鑒定；二是使用鳥槍法。檢索鑒定蛋白質(zhì)采用Swiss Prot數(shù)據(jù)庫，最終將數(shù)據(jù)使用生物信息學(xué)進(jìn)行分析。結(jié)果：大體觀察與X線顯示，術(shù)后12周開始

3、股骨頭出現(xiàn)局部塌陷，至25周塌陷加重，且出現(xiàn)髖關(guān)節(jié)間隙狹窄；25周MRI檢測顯示了股骨頭缺血性壞死；組織學(xué)檢測顯示造血細(xì)胞壞死，骨小梁壞死吸收斷裂，骨細(xì)胞壞死呈空陷窩于8周達(dá)高峰>60％，12周和25周髓腔內(nèi)可見大量骨碎片。激素聯(lián)合缺氧處理細(xì)胞24h時，細(xì)胞凋亡率表現(xiàn)的最顯著，Cleaved casp-3增加最為顯著，Cleaved casp-8增加不顯著，Cleaved casp-9增加較為明顯，Cleaved casp-12則沒有任

4、何變化。線粒體膜勢能破壞顯著。比較蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)A組特有蛋白為52種，B組為47種，C組為135種，D組為74中，E組為658種。ABCD組共同擁有而E組缺失的為16種蛋白。缺失蛋白主要為線粒體蛋白、核糖體蛋白、以及DNA結(jié)合蛋白。
　　 結(jié)論：無水酒精局部注射誘導(dǎo)骨細(xì)胞凋亡可模擬人類ANFH的病理改變，動態(tài)地觀察其病理演變，可作為適合于多種治療方法的療效和副作用研究的模型。缺氧顯著促進(jìn)激素誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡。死亡受體和線粒體途