AtLEAFY誘導表達對菊花花期調(diào)控的研究.pdf

1、菊花（Dendranthemamorifolium）為菊科多年生草本植物，是我國十大傳統(tǒng)名花之一，同時也是太原、開封、蕪湖等城市的市花。根據(jù)菊花花期的早晚可以將其劃分為夏菊和秋冬菊。夏菊的花期一般在夏季，但其品種較為單一，且花型較小，觀賞性較差，多被應用于街道美化。更多的菊花屬于嚴格的短日照植物，在晚秋或者冬季開花。這樣使得觀賞性較強的菊花花期受到了季節(jié)的限制，導致其商品性降低。常規(guī)控制花期調(diào)控的方法已有較多研究，如對園藝栽培技術(shù)、光照

2、時間以及溫度的調(diào)控。但是這些方法大多數(shù)操作繁瑣，條件不易控制，提高了花卉的成本。
　　本研究主要目標是:利用農(nóng)桿菌介導的葉盤轉(zhuǎn)化法，以大菊品種黃金虎(Dendranthemamorifolium(Ramat)Kitamura)的野生型及實驗室已有的轉(zhuǎn)基因菊花植株Y4（由rd29A∷SOC1植物表達載體轉(zhuǎn)化野生型黃金虎獲得）為植物材料，分別導入由rd29A啟動子調(diào)控表達的具有控制植物開花時間功能的LEAFY基因，旨在獲得通過簡單易控

3、的方法調(diào)控花期的菊花新種質(zhì)。主要實驗結(jié)果如下:
　　1.植物表達載體的構(gòu)建:從擬南芥mRNA擴增獲得的花分生組織特征基因LEAFY。使用改造的pCambia2300表達載體(已含有脅迫誘導啟動子rd29A)，使用酶切、連接等方法將LEAFY基因連接到rd29A啟動子的下游。使用酶切和PCR檢測技術(shù)，鑒定重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化土壤農(nóng)桿菌LBA4404。
　　2.轉(zhuǎn)基因植株的獲得:使用葉盤法轉(zhuǎn)化菊花品種黃金虎野生型和Y4株系，分別獲得

4、54和49個抗性芽，在無選擇壓的培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得相同數(shù)目的再生苗;對再生苗進行生根抗性篩選，分別獲得23和45個生根抗性苗;采用PCR技術(shù)檢測生根抗性苗，最終獲得3和4個陽性苗，分別命名為L1、L2和L3（以野生型為遺傳背景）以及SL1、SL2、SL3和SL4（以Y4為遺傳背景）。轉(zhuǎn)化率為2.02％和3.73％。
　　3.NaCl脅迫誘導實驗:分別選用四種不同濃度(50、100、150和200mmol/L)的NaCl溶液脅迫誘導處