花期可控型菊花新種質(zhì)的研究.pdf

1、菊花(Dendranthema grandiflorum(Ramat) Kitamura)不僅是我國(guó)的傳統(tǒng)名花和主要切花之一，而且是許多國(guó)家和地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)花卉。但絕大多數(shù)菊花在深秋開(kāi)花，其商品性和觀(guān)賞性受到季節(jié)的嚴(yán)格限制。近年來(lái)一些花發(fā)育調(diào)控基因被應(yīng)用于菊花基因工程中，以期改良菊花的花期特性。SOC1基因是調(diào)控?cái)M南芥開(kāi)花通路中的一個(gè)關(guān)鍵基因，該基因在菊花基因工程中的應(yīng)用研究尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本研究選擇大菊品種‘黃金虎’，建立了高效的不定芽再

2、生體系和穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系，構(gòu)建了脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子rd29A調(diào)控下SOC1的新型表達(dá)載體，并將其轉(zhuǎn)化菊花，獲得了13株轉(zhuǎn)基因植株，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了脅迫處理研究，以期獲得花期可控的菊花新種質(zhì)。主要結(jié)果如下:
　　1.篩選得到了適合菊花‘黃金虎’葉片的不定芽再生體系為MS+3 mg/l6-BA+1.7mg/l NAA，再生頻率高達(dá)96.7％;
　　2.構(gòu)建了新型的植物表達(dá)載體PV003:依托改造的pCambia2300為載體

3、，連接了rd29A啟動(dòng)子，在啟動(dòng)子下游插入了開(kāi)花基因SOC1。并將構(gòu)建好的載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404;
　　3.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)篩選了轉(zhuǎn)化最適的選擇標(biāo)記抗生素卡那霉素的濃度為10 mg/l，抑菌抗生素頭孢霉素的濃度為75 mg/l。生根篩選添加的卡那霉素濃度也為10 mg/l;
　　4.通過(guò)比較不同預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、菌液濃度、侵染時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化的影響，建立了適合菊花‘黃金虎’最佳的遺傳轉(zhuǎn)化體系:將未經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的葉片外植體，在OD600=0.8

4、的菌液濃度下侵染12 min，然后轉(zhuǎn)接于無(wú)抗的不定芽再生培養(yǎng)基上黑暗共培養(yǎng)2d，再進(jìn)行抗性篩選;
　　5.經(jīng)卡那霉素篩選轉(zhuǎn)化的205個(gè)外植體，共獲得71株抗性苗，對(duì)篩選出的抗性苗進(jìn)行PCR檢測(cè)有13株為陽(yáng)性苗，轉(zhuǎn)化率為6.34％;
　　6.通過(guò)250 mM的NaCl脅迫處理Y4等7株轉(zhuǎn)化苗，半定量RT-PCR分析SOC1基因表達(dá)水平，結(jié)果顯示:在不同的轉(zhuǎn)化株中，SOC1基因的表達(dá)有不同水平的增加;干旱脅迫處理Y4植株6d后，