羌活的抗腫瘤活性成分研究.pdf

1、目的：以羌活乙醇提取物為研究對(duì)象，利用各種分離純化技術(shù)對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)研究，從中篩選有抗腫瘤活性的化合物并確定其結(jié)構(gòu)。
　　 方法：⑴采用溶劑提取法對(duì)羌活化學(xué)成分進(jìn)行提取分離，對(duì)抗癌活性較好的羌活醇提物利用不同極性大小的溶劑進(jìn)行萃取，然后分別MTT法和SRB法評(píng)價(jià)各萃取部位對(duì)人肺癌細(xì)胞株和人紅白血病K562的抑制作用，MTT法評(píng)價(jià)各萃取部位對(duì)人肺癌細(xì)胞株A549的抑制作用。⑵采用MTT法，選用人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-AB-

2、231、人結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT-15、人紅白血病細(xì)胞株K562、人肺癌細(xì)胞株A-549共5種腫瘤細(xì)胞株，進(jìn)一步對(duì)各單體化合物進(jìn)行體外抗腫瘤增殖作用研究。⑶將羌活根（2Kg）粉碎后，用95％的乙醇提取2次，合并濾液減壓濃縮至粘膏狀（460 g），將其溶于水中形成懸濁液。分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，繼而得到乙酸乙酯部位（120 g）和正丁醇部位（101 g）。將這兩部位分別采用薄層色譜，硅膠柱色譜和大孔吸附樹(shù)脂色譜及制備型HPLC分離純化，獲

3、得具有抗腫瘤活性的高純度化合物。⑷將獲得的11個(gè)化合物進(jìn)行紫外光譜、質(zhì)譜、核磁共振波譜等測(cè)定，綜合運(yùn)用各種波譜學(xué)技術(shù)（包括UV，ESI-MS，1H NMR，13C NMR）和文獻(xiàn)檢索確定其結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：①M(fèi)TT法測(cè)定結(jié)果顯示乙酸乙酯部位、正丁醇部位和乙醇粗提物對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞株和人肺癌細(xì)胞株A-549的增殖具有顯著的抑制作用，在400 uM時(shí)對(duì)人紅白血病K562細(xì)胞株的抑制率（SRB法）分別為93.9％，87.8％

4、和86.8％；對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的抑制率分別為76.6％，60.3％和74.2％，顯示比較好的抗癌活性，且呈現(xiàn)較好的劑量依賴關(guān)系。②從乙酸乙酯部位鑒定了6-甲氧基當(dāng)歸素或牛防風(fēng)素（sphondin，1），異虎耳草素（isopimpinellin，2），異歐前胡素（isoimperatorin，3），佛手酚（bergaptol，4），8-甲氧基異歐前胡內(nèi)酯（cnidilin，5），異佛手柑內(nèi)酯（isobergapten，

5、6），阿魏酸（ferulic acid，7）和虎耳草素（pimpinellin，9）共8個(gè)化合物；從正丁醇部位鑒定了綠原酸（chlorogenic acid，8），紫花前胡素（nodakenetin，10）和紫花前胡苷（nodakenin，11）共3個(gè)化合物。其中化合物1，2，9為該植物中首次分離得到。③化合物1、2、6和9對(duì)人肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞株的增殖具有抑制作用，IC50值分別為18.4μg/ml、19.6μg/ml、-15.3μ

6、g/ml和47.9μg/ml；化合物1、2、6對(duì)人紅白血病K562的增殖具有抑制作用，IC50值分別為8.8μg/ml、8.5μg/ml、8.8μg/m；化合物2、3、6對(duì)MCF-7細(xì)胞株的增殖具有不同程度的抑制作用，IC50值分別為19.8μg/ml、21.1μg/ml、14.6μg/ml；化合物1、2對(duì)HCT-15細(xì)胞株的增殖具有不同程度的抑制作用，IC50值分別為8.5μg/ml、10.6μg/ml；化合物3和6對(duì)人乳腺癌MDA-

7、MB-231細(xì)胞株的增殖具有不同程度的抑制作用，IC50值分別為25.0μg/ml和21.3μg/ml。
　　 結(jié)論：⑴根據(jù)活性追蹤結(jié)果，發(fā)現(xiàn)羌活乙醇醇提物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位為其抗腫瘤活性部位，對(duì)人肺癌細(xì)胞A549，人紅白血病K562細(xì)胞株的增殖具有顯著的抑制作用。⑵從羌活的乙醇提取物中分離并鑒定了11個(gè)化合物，其中化合物1，2和9為首次從該植物中分離得到。⑶化合物1，2，6和9對(duì)人肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞株的增殖具有顯著抑