甜橙（Citrus sinensis Osbeck）紅肉突變體類(lèi)胡蘿卜素合成相關(guān)基因的克隆與特性分析.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文甜橙（CitrussinensisOsbeck）紅肉突變體類(lèi)胡蘿卜素合成相關(guān)基因的克隆與特性分析姓名：陶能?chē)?guó)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：果樹(shù)學(xué)指導(dǎo)教師：鄧秀新20060601通過(guò)RACE獲得了該基因全長(zhǎng)(命名為CitCpi)。序列分析表明，CitCpi編碼100個(gè)氨基酸，可能參與調(diào)節(jié)柑橘果實(shí)發(fā)育。5、以12個(gè)甜橙品種為材料，采用同源序列法克隆了copia類(lèi)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座予的反轉(zhuǎn)錄酶(RT)區(qū)域。序列分析表明，除夢(mèng)臍橙和哈

2、姆林甜橙一樣外，其余的10個(gè)RT序列高度異質(zhì)。產(chǎn)生這種異質(zhì)性的原因主要有移碼、缺失、堿基替換、終止突變等。Southern雜交表明，copia類(lèi)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子在甜橙基因組中為多拷貝。RToPCR和Northern雜交沒(méi)有發(fā)現(xiàn)copia類(lèi)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座予在紅肉臍橙和清家臍橙果實(shí)和葉片發(fā)育過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄活性。6、克隆了紅色暗柳橙和暗柳橙LcybDNA全長(zhǎng)(分別命名為HAVL毋b和ALLcyb)。結(jié)果表明：HALLcyb和ALLcyb均編碼504個(gè)氨

3、基酸，但有5個(gè)氨基酸的差別。Southern雜交表明，HALLcyb和ALLcyb均為單拷貝。采用MspllHpaII酶切組合結(jié)合Southern雜交發(fā)現(xiàn)，HALLcyb基因組發(fā)生了DNA脫甲基化；CRED—RA分析得到了1個(gè)可能發(fā)生DNA脫甲基化的位點(diǎn)，該位點(diǎn)與反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子有關(guān)。7、以紅肉臍橙不同發(fā)育時(shí)期果肉為材料，構(gòu)建了一個(gè)eDNA文庫(kù)。原始文庫(kù)包含有約5086X105個(gè)克隆，重組率為94％，插入片段大小分布在4002000bp，平

4、均大小為900bp左右。選取300個(gè)克隆進(jìn)行了EST分析，獲得了289個(gè)高質(zhì)量的EST。其中有125個(gè)EST與其他物種相應(yīng)基因的氨基酸序列同源性大于50％；去除重復(fù)EST后，獲得了86個(gè)單一的EST，主要與細(xì)胞防衛(wèi)(256％)、代謝類(lèi)和蛋白質(zhì)修飾／自Ir／貯藏(分別為14％和128％)有關(guān)。8、EST測(cè)序過(guò)程中，獲得了2個(gè)分別編碼生長(zhǎng)素抑制蛋白基因(CitAR)和MADSbox基因(C砌倒DS)全長(zhǎng)的克隆。序列分析表明，CitAR編碼1