不同劑量阿托品和氯磷定對(duì)急性有機(jī)磷中毒所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的影響.pdf

1、目的：本研究通過(guò)建立急性有機(jī)磷中毒(AOPP)大鼠模型，應(yīng)用不同劑量阿托品與氯磷定對(duì)其進(jìn)行治療。通過(guò)觀察大鼠臨床表現(xiàn)、神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化及測(cè)定大鼠大腦乙酰膽堿酯酶(AChE)陽(yáng)性細(xì)胞面積比，探討急性有機(jī)磷中毒神經(jīng)損傷的機(jī)制，同時(shí)了解不同劑量阿托品與氯磷定對(duì)其所致神經(jīng)系統(tǒng)損傷的影響，進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療。
　　 方法：通過(guò)2LD50氧樂(lè)果灌胃染毒建立急性有機(jī)磷中毒模型，并將70只大鼠按隨機(jī)分組原則分為7組，每組10只。A組（空白對(duì)照組

2、）：給實(shí)驗(yàn)組相同體積的生理鹽水胃內(nèi)灌注；其余6組同時(shí)胃內(nèi)灌注2LD50(100mg/kg)的氧化樂(lè)果；B組（未治療組）：染毒后不進(jìn)行任何治療；C組（小劑量氯磷定+適量阿托品）；D組（中等量氯磷定+適量阿托品）；E組（突擊量氯磷定+適量阿托品）；F組（小劑量阿托品+中等量氯磷定）；G組（大劑量阿托品+中等量氯磷定）。24h后將動(dòng)物使用水合氯醛腹腔注射麻醉后活體取腦組織，分別切取大腦皮層、海馬部位的腦組織，迅速將標(biāo)本放入4％的多聚甲醛溶液中

3、固定，做蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色形態(tài)學(xué)觀察、電鏡觀察及乙酰膽堿酯酶(AChE)免疫組化染色觀察。通過(guò)觀察大鼠臨床表現(xiàn)、神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化及測(cè)定大鼠腦內(nèi)AChE陽(yáng)性細(xì)胞面積比，間接了解神經(jīng)損傷程度，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較組間有無(wú)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.中毒大鼠臨床表現(xiàn)A組（空白對(duì)照組）大鼠未發(fā)生任何中毒表現(xiàn)；B組（未治療組）大鼠在染毒約20min后即出現(xiàn)明顯的中毒表現(xiàn)，包括毒蕈堿樣表現(xiàn)

4、（惡心、嘔吐、多汗、流淚、流涎、瞳孔縮小和氣促，其中有3只出現(xiàn)明顯呼吸困難）、煙堿樣表現(xiàn)（四肢發(fā)生肌纖維顫動(dòng)）、中樞神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)（共濟(jì)失調(diào)，昏迷及抽搐）；C組大鼠出現(xiàn)輕度肌纖維顫動(dòng)、口干及共濟(jì)失調(diào)，無(wú)毒蕈堿樣表現(xiàn)；D組大鼠出現(xiàn)輕度共濟(jì)失調(diào)；E組大鼠無(wú)中毒臨床表現(xiàn)，僅有輕度口干；F組大鼠出現(xiàn)輕度惡心、嘔吐、流涎、瞳孔縮小及精神萎靡不振；G組大鼠出現(xiàn)阿托品中毒表現(xiàn)，如瞳孔較前擴(kuò)大、口干、皮膚粘膜干燥，同時(shí)極度煩躁、易激惹。
　　 2

5、.大鼠HE染色結(jié)果A組（空白對(duì)照組）大鼠未發(fā)生任何神經(jīng)系統(tǒng)病變；B組（未治療組）大鼠出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞明顯水腫、變性及壞死；C組大鼠也出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞明顯水腫，但無(wú)神經(jīng)細(xì)胞壞死；D組、F組及G組大鼠發(fā)生輕度神經(jīng)細(xì)胞水腫；E組大鼠神經(jīng)細(xì)胞偶見(jiàn)水腫，無(wú)明顯病變。
　　 3.大鼠電鏡表現(xiàn)海馬神經(jīng)元：A組（空白對(duì)照組）大鼠未發(fā)生任何病變；E組大鼠表現(xiàn)為神經(jīng)元基本正常，膠質(zhì)細(xì)胞水腫；D組、F組及G組大鼠未發(fā)生神經(jīng)元水腫，但表現(xiàn)為神經(jīng)元固縮，電子密度

6、增高，神經(jīng)氈及膠質(zhì)細(xì)胞水腫；C組大鼠出現(xiàn)輕度神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)水腫；B組（未治療組）表現(xiàn)為神經(jīng)元明顯水腫，細(xì)胞器基本正常。
　　 4.大鼠免疫組化染色結(jié)果AChE在A組（空白對(duì)照組）大鼠腦組織中有明顯表達(dá)，而在B組（未治療組）大鼠腦組織中表達(dá)很少，經(jīng)圖像分析后，與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，中毒組較正常對(duì)照組AChE陽(yáng)性細(xì)胞減少，有機(jī)磷對(duì)AChE有抑制作用。AChE在不同治療組大鼠腦組織中有不同表達(dá)，經(jīng)圖像分析后，與A組及

7、B組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，可以認(rèn)為有機(jī)磷化合物對(duì)AChE具有抑制作用，治療組對(duì)AChE具有復(fù)活作用；E組和C組及D組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，可以認(rèn)為突擊量氯磷定組較小劑量及中等劑量氯磷定組對(duì)AChE的復(fù)活作用更好；F組和G組與D組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，尚不能認(rèn)為阿托品對(duì)AChE有影響。
　　 結(jié)論：急性有機(jī)磷中毒可導(dǎo)致大鼠大腦皮層、海馬損傷；不同劑量氯磷定組對(duì)大鼠大腦皮層、海馬AChE均具

8、有復(fù)活作用，以突擊量氯磷定組復(fù)活效果最好，中等量氯磷定組次之，小劑量氯磷定組最差，推測(cè)不同劑量氯磷定均具有減輕大鼠大腦皮層、海馬損傷的作用，且以突擊量氯磷定效果最好；不同劑量阿托品組大腦皮層、海馬AChE陽(yáng)性細(xì)胞面積比組間比較無(wú)意義，且大鼠大腦皮層、海馬HE及電鏡觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)無(wú)差別，尚不能認(rèn)為阿托品對(duì)大腦皮層、海馬AChE有影響，推測(cè)不同劑量阿托品對(duì)減輕大鼠大腦皮層、海馬損傷無(wú)影響，但是否會(huì)通過(guò)緩解M樣癥狀等機(jī)制減輕中樞神經(jīng)損傷尚有