藍光對靈芝內(nèi)源生長素和有效成分積累的影響.pdf

1、論文采用HPLC，紫外分光光度法等方法探明靈芝生長發(fā)育過程中藍光處理對生長素和有效成分（靈芝多糖和靈芝三萜酸）含量的影響。利用已經(jīng)獲得的靈芝基因組信息篩選生長素合成途徑中相關基因和靈芝藍光受體基因，進行相關的生物信息學分析和功能預測。采用熒光定量PCR等方法了解生長素相關基因和藍光受體基因的時空表達情況，了解生長素對光的響應和在靈芝形態(tài)建成中的作用，為開展內(nèi)源激素和光質(zhì)對藥用真菌生長發(fā)育作用的研究提供理論基礎。
　　藍光對靈芝子實

2、體生長素和三萜酸含量都有影響。在靈芝的生長發(fā)育過程中，藍光處理靈芝子實體的干重鮮重均高于對照組。生長素的含量在菌蓋形成期最高，對照組生長素的含量顯著高于藍光處理。采用HPLC對10種三萜酸含量進行分析，發(fā)現(xiàn)靈芝酸A是靈芝子實體內(nèi)含量最高的靈芝三萜酸，3種靈芝烯酸的含量極低，7種靈芝酸的含量均在彈孢前期最高，在彈孢后期藍光處理和對照組三萜酸含量均迅速降低。彈孢前期藍光處理的7種靈芝酸的含量均顯著高于對照組。
　　利用KEGG網(wǎng)站對I

3、AA合成途徑進行預測，結果表明，IAA合成途徑包含在色氨酸代謝途徑中，編號為00380。靈芝編碼基因序列中與色氨酸代謝途徑相關的有41個，其中有13條序列與IAA合成有關，包括2個色氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Tryptophan amino transforase，Tam1），1個芳族基-L-氨基酸脫羧酶(Aromatic-l-amino-acid decarboxylase，DDC)，1個單胺氧化酶(Diamine oxidase，AOC1)，6個

4、醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase(NADP+),Aldh)，和3個酰胺酶(Amidase，AMI)。預測結果表明，靈芝中存在完整的色胺途徑，并且可能存在吲哚丙酮酸途徑和吲哚乙酰胺途徑，但是只預測到了吲哚丙酮酸途徑中的Tam1和吲哚乙酰胺途徑中的AMI。同時克隆得到了靈芝中兩個藍光受體基因Glwc-1和Glwc-2，與子囊菌模式真菌粗糙脈孢菌的藍光受體基因Ncwc-1和Ncwc-2同源，利用推導出的氨基酸序列進行功能

5、結構域分析發(fā)現(xiàn)G1WC-1包含與NcWC-1類似的LOV，PAS B，PAS C和PAC結構域。G1WC-2中包含的PAS結構域和GATA型鋅指結構同樣屬于真菌WC-2蛋白的特征結構域。應用MEGA5.0軟件對G1WC-1和G1WC-2進行系統(tǒng)進化分析，同樣說明他們是靈芝中的藍光受體。
　　采用實時熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR)對藍光處理和對照組靈芝子實體生長素生物合成途徑中13關鍵酶基因表

6、達進行分析，發(fā)現(xiàn)在自然生長狀態(tài)下靈芝生長發(fā)育的四個階段均檢測到了13個生長素相關的生物合成基因的表達，其中12個基因相對表達量均在菌蓋形成期最高，且顯著高于現(xiàn)蕾期、彈孢前期及彈孢后期，與靈芝子實體中生長素的含量變化趨勢一致。因此我們推測菌蓋形成期靈芝子實體的生長和代謝都處于旺盛的階段，是子實體生命活動活躍的時期。藍光處理后生長素合成相關基因的表達情況與對照組的表達情況有很大的差異，說明藍光對生長素的合成有一定影響，這需要進一步的實驗驗證