胃癌中PTEN與B7-H1蛋白表達的相關性及機制研究.pdf

1、PTEN(也稱MMAC1或TEP1)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因,它是至今發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因,被視為p53后時代最重要的抑癌基因。其產(chǎn)物PTEN蛋白具有脂質(zhì)磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性,能夠使其底物PIP3去磷酸化,從而下調(diào)PI3K/AKT細胞信號轉導通路的活性。實驗證實PTEN也主要是通過作用于PIP3阻斷PI3K/AKT信號通路來發(fā)揮其抑癌作用的。目前,發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤組織和腫瘤細胞株中有PTEN

2、基因的缺失或突變及蛋白表達異常。B7-H1又稱PD-L1,是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的共刺激分子,雖然B7-H1 mRNA廣泛表達在人體多種正常組織中,但B7-H1蛋白在正常組織中的表達僅限于巨噬細胞系統(tǒng)來源的細胞。近年來,研究發(fā)現(xiàn)B7-H1也表達在多種腫瘤組織和多種腫瘤細胞株中,并在誘導特異性T細胞凋亡和腫瘤免疫逃逸過程中發(fā)揮重要作用。關于惡性腫瘤中調(diào)節(jié)B7-H1蛋白表達的機制,國內(nèi)外鮮有報道。不久前,國外有學者以神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞為研究對象,

3、發(fā)現(xiàn)PTEN的缺失導致神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞表面B7-H1蛋白分子表達增加并介導免疫抵抗,并提出其機制是通過PI3K/AKT下游的mTOR-S6K通路實現(xiàn)對B7-H1基因翻譯水平的調(diào)控,從而導致其蛋白表達增加。胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,在我國胃癌的發(fā)病率和死亡率居各種惡性腫瘤的首位。目前尚未見有關胃癌組織中B7-H1蛋白表達調(diào)節(jié)的研究報道。因此,本研究采用免疫組化和Western Blot技術檢測胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與

4、P-S6K的表達情況,探討胃癌組織中PTEN蛋白與B7-H1蛋白表達的相關性及其機制。
　　方法：1.免疫組化檢測胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K蛋白的原位表達采用二步法免疫組化檢測48例胃癌組織及11例癌旁正常組織中的PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K的表達,分析PTEN與B7-H1蛋白在胃癌組織中的表達情況以及它們分別與胃癌患者臨床病理學指標的關系,通過連續(xù)性切片各個指標的染色分析在胃癌組織中PTEN、

5、B7-H1、S6K與P-S6K原位表達的相關性。2.Western Blot半定量胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K蛋白的表達采用Western Blot技術檢測胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K和P-S6K的表達,用Fluorchem分析軟件半定量檢測結果,分析胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K蛋白表達水平的相關性。3.統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理,陽性率之間的比較采

6、用x~2檢驗,兩變量之間的相關性分析采用計數(shù)資料的相關分析或者Spearman等級相關分析,以α=0.05為檢驗水準。
　　結果：1.免疫組化結果1.1 PTEN原位表達結果胃癌組織中PTEN呈陽性表達,陽性信號主要位于細胞漿,少量位于細胞核內(nèi),陽性表達率為43.75％(21/48),而癌旁正常胃黏膜中PTEN陽性表達率為100％(11/11),二者之間有統(tǒng)計學差異,P<0.05。PTEN在胃癌組織中的表達與患者的年齡、性別、腫瘤

7、的大小無顯著相關性(P>0.05),與腫瘤的浸潤深度、有無淋巴結轉移、分化程度、臨床分期有顯著相關性(P<0.05)。1.2 B7-H1原位表達結果胃癌組織中B7-H1呈陽性表達,陽性信號主要位于細胞膜,少量位于細胞漿,陽性表達率為62.50％(30/48),而癌旁正常胃黏膜中未見B7-H1分子的表達,二者之間有統(tǒng)計學差異,P<0.05。B7-H1在胃癌組織中的表達與患者的年齡、性別、腫瘤的大小、分化程度無顯著相關性(P>0.05),與

8、腫瘤的浸潤深度、有無淋巴結轉移、臨床分期有顯著相關性(P<0.05)。1.3胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K原位表達的相關性統(tǒng)計學分析顯示:PTEN蛋白與B7-H1蛋白的原位表達明顯負相關(P<0.05),PTEN蛋白與P-S6K蛋白的原位表達明顯負相關(P<0.05),B7-H1蛋白與P-S6K蛋白的原位表達明顯正相關(P<0.05),PTEN蛋白與S6K蛋白的原位表達無關聯(lián)(P=0.383),B7-H1蛋白與S6K

9、蛋白的原位表達無關聯(lián)(P=0.551)。2.Western Blot結果在胃癌組織中,PTEN蛋白與B7-H1蛋白表達水平顯著負相關(P<0.05,r=-0.667),PTEN蛋白與P-S6K蛋白表達水平顯著負相關(P<0.05,r=-0.610),B7-H1蛋白與P-S6K蛋白表達水平顯著正相關(P<0.05,r=0.724),PTEN蛋白與S6K蛋白表達水平不相關(P=0.601),B7-H1蛋白與S6K蛋白表達水平不相關(P=0.