脂肪酸營(yíng)養(yǎng)對(duì)中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)免疫及耐低氧能力的影響.pdf

1、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）又稱(chēng)毛蟹，河蟹，屬甲殼綱，十足目，方蟹科，絨螯蟹屬，為我國(guó)特產(chǎn)。主要分布于中國(guó)東部海域沿岸及通海的河流、湖泊中，現(xiàn)為我國(guó)主要養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)蟹類(lèi)。近幾年河蟹的養(yǎng)殖面積不斷地增加，其養(yǎng)殖產(chǎn)量2005年高達(dá)57萬(wàn)噸。池塘養(yǎng)殖是我國(guó)河蟹養(yǎng)殖最主要的養(yǎng)殖形式，在池塘養(yǎng)殖過(guò)程中，特別是高溫季節(jié)，大量的殘剩飼料以及生物的排泄物等有機(jī)廢物無(wú)法被及時(shí)分解而不斷沉積，加之許多養(yǎng)殖池塘由于多年的養(yǎng)殖疏于清淤，造成

2、池塘沉積過(guò)多的淤泥，這大大增加了池塘底部有機(jī)耗氧，使池塘底質(zhì)惡化，致使主要底棲習(xí)性的河蟹長(zhǎng)期處于低氧的環(huán)境脅迫下(hypoxiastress)。中華絨螯蟹在低氧脅迫下，一方面可能造成其免疫機(jī)能的下降，抗病力降低，繼而感染疾病而招致死亡。另一方面免疫能力的下降又會(huì)降低其抗低氧能力，兩者相互作用的疊加，是最終造成高溫季節(jié)河蟹大量死亡的重要因素之一。
　　改善中華絨螯蟹的營(yíng)養(yǎng)，研究營(yíng)養(yǎng)與其抗環(huán)境脅迫能力的關(guān)系，是提高其免疫性能和抗低氧能

3、力的一個(gè)主要途徑。必需脂肪酸(EFA)如:花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的生理和生化合成中起著各種各樣的功能。ARA，EPA和DHA等脂肪酸是細(xì)胞膜的重要組成部分，能夠影響細(xì)胞吞噬能力及呼吸爆發(fā)強(qiáng)度，還可以通過(guò)控制與免疫相關(guān)的酶活性而增強(qiáng)水生動(dòng)物機(jī)體的免疫能力。同時(shí)ARA和EPA是類(lèi)二十烷酸的前體，類(lèi)二十烷酸是一族在各種應(yīng)激反應(yīng)中具有高度活性的分子，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的免疫及抗脅迫能力有重

4、要的作用。但是，關(guān)于脂肪酸營(yíng)養(yǎng)對(duì)中華絨螯蟹幼蟹免疫和耐低氧脅迫的研究從未有過(guò)報(bào)道，在這個(gè)方面還是空白。本論文的目的，首先研究低氧對(duì)中華絨螯蟹幼蟹免疫及生理的影響;然后改變飼料中高不飽和脂肪酸（ARA，DHA，DHA/EPA）的含量，測(cè)定脂肪酸營(yíng)養(yǎng)對(duì)幼蟹免疫和耐低氧能力的影響;最后，對(duì)中華絨螯蟹成蟹投喂含三種不同魚(yú)油、豆油的飼料，測(cè)定不同油脂對(duì)成蟹免疫及耐低氧能力的影響。取得成果具體如下:
　　1、低氧對(duì)中華絨螯蟹（Eriochei

5、r sinensis）幼蟹免疫及生理的影響
　　中華絨螯蟹幼蟹(1.4±0.43g)放入溶解氧為2.04±0.16（低氧，處理組）和8.01±0.22 mg/L（正常溶氧，對(duì)照組）的水體中24h，測(cè)量了其在0和24h后的總血細(xì)胞密度(THC)，透明血細(xì)胞密度。在試驗(yàn)和對(duì)照組中，對(duì)0，2，8和24h時(shí)血淋巴中超氧化物歧化酶活性(SOD)，乳酸，血藍(lán)蛋白的濃度以及肝胰腺的代謝（葡萄糖，總膽固醇，尿酸，總蛋白，尿素和甘油三酯的濃度）進(jìn)行

6、了測(cè)定分析。總血細(xì)胞和透明血細(xì)胞密度受低氧影響顯著，在低氧24h后比起始濃度分別降低了66％和49％。SOD酶活性在低氧8h后比起始時(shí)顯著升高，乳酸濃度在低氧2，8和24h后都顯著升高。血藍(lán)蛋白濃度呈現(xiàn)一個(gè)先降低后上升的趨勢(shì)，24h時(shí)與初始差異不大。試驗(yàn)組中，肝胰腺的葡萄糖，膽固醇和尿酸含量在24h內(nèi)發(fā)生了顯著變化。總蛋白，尿素和甘油三酯的濃度在對(duì)照和試驗(yàn)組中0，2，8，24h之間均沒(méi)有顯著差異。由此可見(jiàn)，低氧對(duì)中華絨螯蟹幼蟹的影響是全

7、面的。
　　2、投喂不同DHA或ARA含量的飼料對(duì)中華絨螯蟹幼蟹（Eriocheirsinensis）免疫和耐低氧能力的影響
　　用含不同濃度的必需脂肪酸(EFA)——DHA(C22:6n-3)或ARA(C20:4n-6)飼料分別投喂中華絨螯蟹幼蟹3個(gè)半月和4個(gè)月，然后測(cè)定了其低氧24h（DHA和ARA試驗(yàn)）和正常溶氧下（ARA試驗(yàn)）的免疫和生理性能。五種不同DHA和ARA飼料(D1，D2，D3，D4，D5和A1，A2，A3

8、，A4，A5)中DHA和ARA的添加比例為0％，0.25％，0.5％，1％，1.5％和0％，0.3％，0.6％，0.9％，1.2％（占飼料干重比例）。在DHA飼料試驗(yàn)中幼蟹低氧24h后血淋巴中THC（總血細(xì)胞密度）和透明血細(xì)胞密度在五個(gè)飼料組之間沒(méi)有顯著性差異。在五個(gè)飼料組間，Hc（血藍(lán)蛋白）的變化呈現(xiàn)先降低后上升再下降的趨勢(shì)，飼料中DHA的添加對(duì)Hc的濃度有顯著影響。低氧24h后在添加DHA的飼料組SOD酶的活性顯著高于0％DHA添加

9、組。在肝胰腺中，隨著飼料中添加DHA含量的增加總膽固醇和甘油三酯含量逐漸上升。在ARA試驗(yàn)中，低氧脅迫對(duì)幼蟹的生理和免疫指標(biāo)的影響明顯。在正常溶氧下，飼料中ARA的添加使幼蟹血淋巴中THC和透明血細(xì)胞密度顯著上升，特別是適量添加時(shí)更明顯(0.6，0.9％)。然而，在正常和低氧下血淋巴中SOD活性和Hc的含量不受飼料中添加ARA量的影響，各個(gè)飼料組之間沒(méi)有顯著差異。在兩個(gè)溶氧下飼料中適當(dāng)?shù)奶砑覣RA(0.6，0.9％)對(duì)血淋巴中乳酸和尿酸

10、的濃度影響顯著。低氧脅迫后肝胰腺中的免疫和生理性能在各ARA飼料組間沒(méi)有顯著差異?？傊?，低氧對(duì)幼蟹的免疫生理代謝有明顯的負(fù)面影響。飼料中DHA的添加對(duì)中華絨螯蟹幼蟹的營(yíng)養(yǎng)和生理性能及抗低氧的能力有改善作用。ARA試驗(yàn)結(jié)果表明飼料中添加適量水平的ARA(0.6，0.9％)能顯著改善中華絨螯蟹幼蟹免疫和生理代謝功能及抗低氧的能力。
　　3、投喂不同DHA/EPA比例飼料對(duì)雌雄中華絨螯蟹幼蟹（Eriocheirsinensis）免疫和耐

11、低氧能力的影響
　　中華絨螯蟹幼蟹(1.32-1.76g)投喂不同DHA/EPA(DHA，C22:6n-3; EPA，C20:5n-3)比例的飼料3個(gè)月，然后將其放入溶解氧為2.34±0.30mg/L和8.02±0.35mg/L的水體中24h，測(cè)定其生理和免疫指標(biāo)的變化。含不同DHA/EPA比例的飼料分為5組(簡(jiǎn)稱(chēng):DE1，DE2，DE3，DE4，DE5)，其中DHA/EPA的比例分別為:0.3，0.6，1，2和3。測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，

12、飼料中血液的免疫指標(biāo)受飼料中DHA/EPA比例變化的影響不大，但是低氧后血藍(lán)蛋白含量及正常溶氧下γ-GGT酶活性受飼料中DHA/EPA比例的影響顯著?？寡趸窼OD在正常溶氧下隨DHA/EPA的增加呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，但是低氧后各組之間的SOD活性沒(méi)有顯著差異。血淋巴中生理代謝指標(biāo)受DHA/EPA比例變化影響顯著，特別是乳酸脫氫酶的活性。另外，低氧對(duì)河蟹幼蟹的生理免疫影響顯著。在肝胰腺中，受低氧脅迫后，γ-GGT酶活性和葡萄糖含量在DHA/

13、EPA比例為2時(shí)顯著高于其他組，而乳酸的含量在DHA/EPA比例為1的組最高。幼蟹性別對(duì)河蟹免疫和生理代謝指標(biāo)基本沒(méi)有影響?？偠灾暳现蠨HA/EPA比例為1和2時(shí)對(duì)中華絨螯蟹幼蟹的免疫和生理更有益，對(duì)其抗低氧脅迫也更有幫助。
　　4、投喂添加三種不同油脂(魚(yú)油、豆油、魚(yú)油豆油混合(1∶1))飼料對(duì)中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）免疫及耐低氧能力的影響
　　為了研究飼料中添加魚(yú)油，豆油對(duì)中華絨螯蟹成蟹體

14、重，免疫，代謝和耐低氧的影響，配制了添加不同魚(yú)油和豆油比例的三種蟹用飼料，分別投喂中華絨螯蟹成蟹115d，然后測(cè)量了它們體重的變化，再將其放入溶解氧為2.57±0.44和9.06±0.06mg/L的水體中90h，測(cè)量其免疫和代謝指標(biāo)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn):投喂含三種不同油脂飼料的中華絨螯蟹各組之間體重沒(méi)有顯著性差異;低氧脅迫對(duì)河蟹代謝指標(biāo)影響較大;添加魚(yú)豆混合油組飼料對(duì)中華絨螯蟹免疫和抗氧化能力有促進(jìn)作用，相較于其他兩組，此組河蟹耐低氧的能力